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目的蛋白加myc或his标签？
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最近在研究一个蛋白的表达量，但是来不及做抗体了，想直接在目的蛋白的后面l连个myc或his标签，可以直接用标签的抗体来检测目的蛋白的变化。 但是我的目的基因（蓝藻、原核生物）与它前后的基因均存在重叠的部分，如果加标签会不会影响它前后基因的功能？这种情况还能加标签吗？怎么加？ 请高手指点！我是个新虫，金币较少，请见谅！ |
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【答案】应助回帖
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amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-25 20:42:46
shuihaizi(金币+2): 2011-07-25 21:58:36
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-25 20:42:46
shuihaizi(金币+2): 2011-07-25 21:58:36
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楼主说的目的基因与它前后的基因均存在重叠是什么意思？不太明白。 以我个人的经验，可以在你目的蛋白加上标签，在标签和目的蛋白之间引入一个蛋白酶，这样你可以通过标签抗体来定表达量，然后用蛋白酶切割来研究目的蛋白。这样不仅可以定量，也可以研究蛋白性质。 具体可以再N端加上His标签，His标签与目的蛋白之前引入肠激酶。PS：比较推荐使用肠激酶的原因是肠激酶识别序列是DDDDK而发生切割是在K的后面，也就是说可以让你的目的蛋白有完整的N端，但是如果你目的蛋白序列里存在DDDDK或者DDDK或者DDK甚至DK都会发生非特异切割。如果这种情况就不建议您使用了。 貌似跑题了。。。。总之，有问题再交流 = =！ |
2楼2011-07-25 20:27:38
3楼2011-07-25 22:05:35
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5楼2011-07-25 23:42:28
6楼2011-07-26 08:39:56
dasheng1980
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