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happywoheni

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[求助] pcr产物测序问题

前两天把pcr产物送去测序了，只有上下游引物没有测出来，比目的基因少了几十bp,这样得到的序列有用吗？是不是要进行下一步连接转化后再测序更好？

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1楼2011-07-22 12:08:43

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happywoheni

铁虫 (小有名气)

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如果只做克隆，难道这样的少了上下游引物的序列也可以？不行吧，还不是一样得知道全长。

10楼2011-07-22 20:43:34

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空谷幽风

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【答案】应助回帖

★ ★
happywoheni(金币+1): 2011-07-22 12:35:53
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 16:51:53

测PCR产物不是上下游引物没测出来而是测不出来，如果你对当前的测序原理懂的话就知道为什么测不出来了，如果想得到全序列的信息必须要连到载体上，让后从载体上找引物来测，所以连转这一步是绝对有必要的

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2楼2011-07-22 12:28:06

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chenguestc

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-22 16:52:07

（1）请公司重测，无需缴费。
（2）请查看是否只是下游引物未测出来，上游有可能是非特异结合（即序列与你的引物序列仅有1个甚至几个碱基的差别）

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3楼2011-07-22 12:30:03

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【答案】应助回帖

你的引物设计在什么位置？

4楼2011-07-22 12:32:04

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