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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物测序问题
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happywoheni

铁虫 (小有名气)

[求助] pcr产物测序问题

前两天把pcr产物送去测序了，只有上下游引物没有测出来，比目的基因少了几十bp,这样得到的序列有用吗？是不是要进行下一步连接转化后再测序更好？
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1楼2011-07-22 12:08:43
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-22 16:52:07
（1）请公司重测，无需缴费。
（2）请查看是否只是下游引物未测出来，上游有可能是非特异结合（即序列与你的引物序列仅有1个甚至几个碱基的差别）
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3楼2011-07-22 12:30:03
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
happywoheni(金币+1): 2011-07-22 12:35:53
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 16:51:53
测PCR产物不是上下游引物没测出来而是测不出来，如果你对当前的测序原理懂的话就知道为什么测不出来了，如果想得到全序列的信息必须要连到载体上，让后从载体上找引物来测，所以连转这一步是绝对有必要的
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2楼2011-07-22 12:28:06
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你的引物设计在什么位置？
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4楼2011-07-22 12:32:04
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happywoheni

铁虫 (小有名气)
差几十bp，算了下，差不多就是上下游引物的。那下一步做转化再测序吧！这样就可以测全吧
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5楼2011-07-22 12:38:48
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