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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 反转录后PCR无条带
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tanxi125

银虫 (小有名气)

[求助] 反转录后PCR无条带

我多次提取RNA OD值一直在1.4-1.6之间，反转录后扩增条带均无发发扩初目的条带来。  另外我想知道反转录的cDNA能不通过PCR后检测吗，也就是反转录好了直接跑胶！
目的条带长670bp，Tm值为 59.58,56.84℃，卧我采用的是53度。
体系是：
水  14.4
buffer  2
(2.5μM)dNTP  1.6
cDNA   1
(10μM)引物 各  0.4
酶  0.2


[ Last edited by tanxi125 on 2011-7-21 at 18:06 ]
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什么都得靠自己！我现在深刻理解！
1楼 2011-07-21 18:04:38
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-21 20:26:57
tanxi125(金币+2): 2011-09-27 18:17:43
一般cDNA不会直接跑电泳，因为量太少，不过我看过有人跑过的，好像是一丝不明显的条带。LZ也可以试试。
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5楼2011-07-21 19:42:53
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-21 20:26:45
你跑跑管家基因，看看能不能有带，比如beta-actin。
这也不出带，就很可能你模板质量不行了，最好重新提RNA
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2楼2011-07-21 19:18:25
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 辛苦 2011-07-21 20:26:53
LS正解，用一些内参 或者 已经用这个模板P出的引物作为内参，先看模板行不行，毕竟里面的可能影响因素太多。
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3楼2011-07-21 19:40:45
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
没做过，不过顶一下，希望有高人指点！！！
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4楼2011-07-21 19:41:20
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