24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 5849  |  回复: 12
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lixiaojing1318

银虫 (小有名气)


[交流] 荧光定量需要3个重复样本吗 已有8人参与

荧光定量需要3个重复样本吗,还是只要一个样品,做3个重复?
提完RNA后,需要定量到相同浓度吗?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(金币+1): 鼓励西瓜 2011-07-31 18:04:46
引用回帖:
Originally posted by lixiaojing1318 at 2011-07-20 22:11:13:
我是才开始准备做荧光定量,先做了个普通PCR,发现有引物二聚体存在,该怎么消除呢

可以提高退火温度以增强特异性,你看看用的酶推荐的退火温度最高是多少就用多少。
不知道你用的是两步法还是三步法,三步法(传统的变性、退火、延伸三步)特异性更好。
上面两个方法都不行的话,考虑重新设计引物。
6楼2011-07-21 11:45:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

足下客

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-07-19 12:52:45
不太明白你问的问题的意思。一般来讲荧光定量每个样本都要做3个孔,这是严格来讲。不管是测RNA还是DNA当然要把浓度调成一样的,要不然这个定量就没有什么意义了。不知道你具体是做什么实验,想达到什么目的。
2楼2011-07-19 12:45:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 学习了! 2011-07-19 16:25:52
你说的是biological replicate 和 technical replicate,一般每个样本做三到四个技术重复,这个貌似是荧光定量必需的
生物学重复就是可以独立重复提取两三次,分别进行实验,荧光定量最好需要生物学重复~~
另外RNA量最好定在一个范围里面,虽然有内参基因校正,但是大部分综述推荐,这样好调整模版量,并且由于是扩增反应,在2ΔΔct如果扩增效率不平行,很可能误差会放大,因此ΔΔct也最好都做个标准曲线,样品浓度最好在标准曲线范围内。
摘自google~
A technical replicate involves the multiple labeling or reciprocal labeling of the same RNA sample. The purpose of a technical replicate is to control for technical variability within an experiment (array to array variation, reagent variation, dye incorporation, etc.) A well run experiment should have minimal variation thus minimizing the need for technical replicates.
A biological replicate involves isolating RNA independently from replicate sources (multiple cell lines, multiple biopsies, multiple patients, etc). The purpose of a biological replicate is to control for biological diversity. Biological replicates are often more telling, and for this reason are “better” than technical replicates, however, biological replicates are often more difficult to obtain

[ Last edited by shaquila on 2011-7-19 at 13:47 ]
3楼2011-07-19 13:09:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixiaojing1318

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-07-19 13:09:50:
你说的是biological replicate 和 technical replicate,一般每个样本做三到四个技术重复,这个貌似是荧光定量必需的
生物学重复就是可以独立重复提取两三次,分别进行实验,荧光定量最好需要生物学重复~~
另 ...

您说的RNA定在一定的浓度范围内,这个大概是相差多少为好呢
4楼2011-07-20 22:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 22408调剂求助 +5 毂12 2026-04-09 7/350 2026-04-10 16:32 by 高维春
[考研] 301求调剂 +4 XYPLR 2026-04-05 6/300 2026-04-10 09:17 by Delta2012
[考研] 297求调剂 +27 GENJIOW 2026-04-07 30/1500 2026-04-09 23:20 by wolf97
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +9 木子念晞 2026-04-05 9/450 2026-04-09 20:04 by vgtyfty
[考研] 电子信息270求调剂 +11 terminal469 2026-04-07 11/550 2026-04-09 18:28 by hy861222
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所,有机化学356分找调剂 +11 Nadiums 2026-04-09 11/550 2026-04-09 18:04 by lijunpoly
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-09 8/400 2026-04-09 15:17 by 探123
[考研] 材料专硕322 +14 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 14/700 2026-04-09 13:25 by 5268321
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +11 Mr. Z 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:15 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +9 月@163.com 2026-04-07 11/550 2026-04-08 14:48 by qlm5820
[考研] 336求调剂,一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] 一志愿C9的化学工程(085602) 340分,感觉校内调剂无望,求调剂 +12 万事宜臻 2026-04-04 12/600 2026-04-06 07:46 by 无际的草原
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
信息提示
请填处理意见