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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】菜鸟一问：用荧光分光光度计如何定量？
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annietop

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】菜鸟一问：用荧光分光光度计如何定量？已有9人参与

我使用的仪器型号：Perkin－Elmer LS－５ fluorescence spectrophotometer

经过激发和发射扫描后，我确定了激发和发射的最高峰对应的波长值，我想用不同浓度的溶液制作标准曲线，可以用峰高来确定标准值吗？又如何确定？是不是只要在激发和发射最大值时候的读数就是这个标准值？
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Insist forever!
1楼2010-05-27 00:15:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cxj792190

木虫 (正式写手)
annietop(金币+5):谢谢回复！ 2010-05-29 13:50:15
内容已删除
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早起的成
好久不见
5楼2010-05-28 08:43:43
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cxj792190

木虫 (正式写手)
annietop(金币+3):谢谢回复！ 2010-05-29 13:46:05
通常是通过发射光谱进行定量，就是固定激发波长，扫描不同浓度溶液的发射光谱，以其峰高处对应的相对荧光强度与浓度作标准曲线。在测定未知物的荧光强度在标准曲线上查找对应浓度。
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好久不见
2楼2010-05-27 16:40:37
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May2010

木虫 (著名写手)
annietop(金币+1):谢谢！ 2010-05-29 13:46:25
恩。没错的。就是用2楼的办法，先配系列浓度的溶液，然后做出标准曲线或者回归方程。然后再测待测溶液的荧光强度，把强度代入标准曲线中求浓度。
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人生能有几回搏？！
3楼2010-05-27 21:45:02
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dx109

铁杆木虫 (著名写手)
annietop(金币+2):谢谢回复！ 2010-05-29 13:50:28
同意楼上的说法，不过需要注意的是浓度不能太大以杜绝荧光淬灭等的影响。
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6楼2010-05-28 08:50:34
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超然逸群

铜虫 (小有名气)
annietop(金币+5):多谢详细解答！ 2010-05-29 13:52:10
高浓度时溶液黏度增大，分子碰撞可能增大，激发态分子可能因为碰撞而失去能量而返回基态，因而荧光强度可能降低。并且高浓度时可能有自吸收作用，或者生成激基禘和物甚至基态二聚体。
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9楼2010-05-29 08:24:00
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超然逸群

铜虫 (小有名气)
annietop(金币+5):谢谢解释～ 2010-05-30 00:50:57
引用回帖:
Originally posted by annietop at 2010-05-29 13:51:01:


什么是神经网络方法啊？

神经网络方法就是模拟人脑结构处理信息的一种方法，因为荧光强度通常和浓度之间是非线性的关系，而神经网络特别适合处理这种非线性的信息。可以上网搜一下文献，这方面的东西还是挺多的。
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12楼2010-05-29 20:29:41
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普通回帖

annietop

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cxj792190 at 2010-05-27 16:40:37:
通常是通过发射光谱进行定量，就是固定激发波长，扫描不同浓度溶液的发射光谱，以其峰高处对应的相对荧光强度与浓度作标准曲线。在测定未知物的荧光强度在标准曲线上查找对应浓度。

还有别的方法吗？我一开始就是按照你这种方法做的，但是根本没有什么线性关系，据说有一种方法是找到最大激发和发射波长，此时的荧光读数与对应浓度做曲线，大家再提个意见把
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Insist forever!
4楼2010-05-27 23:53:51
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超然逸群

铜虫 (小有名气)
annietop(金币+2):谢谢！ 2010-05-30 00:50:27
测不同浓度溶液的发射谱或者激发谱，用神经网络的方法
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7楼2010-05-28 18:43:57
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xkp123

木虫 (著名写手)
annietop(金币+1):谢谢！ 2010-05-29 13:52:25
引用回帖:
Originally posted by dx109 at 2010-05-28 08:50:34:
同意楼上的说法，不过需要注意的是浓度不能太大以杜绝荧光淬灭等的影响。

很正确，不过为什么浓度高会猝灭？能解释下不
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8楼2010-05-28 22:18:58
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annietop

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cxj792190 at 2010-05-28 08:43:43:
最大激发与最大发射波长的扫描方法：可先选择将紫外吸收波长作为激发波长，扫描其发射光谱，以其最大吸收处作发射波长，再固定扫描得到的发射波长扫描激发光谱，可能又会得到一最大激发波长，然后再做发射光谱，再 ...

那我看看去，如果有这一项功能还能验证一下。你说的这个方法和2楼的方法是一样的，还有没有别的方法？
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Insist forever!
10楼2010-05-29 13:49:29
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