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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】菜鸟一问：用荧光分光光度计如何定量？
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annietop

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】菜鸟一问：用荧光分光光度计如何定量？ 已有9人参与

我使用的仪器型号：Perkin－Elmer LS－５ fluorescence spectrophotometer

经过激发和发射扫描后，我确定了激发和发射的最高峰对应的波长值，我想用不同浓度的溶液制作标准曲线，可以用峰高来确定标准值吗？又如何确定？是不是只要在激发和发射最大值时候的读数就是这个标准值？
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Insist forever!
1楼 2010-05-27 00:15:53
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annietop

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cxj792190 at 2010-05-27 16:40:37:
通常是通过发射光谱进行定量，就是固定激发波长，扫描不同浓度溶液的发射光谱，以其峰高处对应的相对荧光强度与浓度作标准曲线。在测定未知物的荧光强度在标准曲线上查找对应浓度。

还有别的方法吗？我一开始就是按照你这种方法做的，但是根本没有什么线性关系，据说有一种方法是找到最大激发和发射波长，此时的荧光读数与对应浓度做曲线，大家再提个意见把
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Insist forever!
4楼2010-05-27 23:53:51
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cxj792190

木虫 (正式写手)
annietop(金币+3):谢谢回复！ 2010-05-29 13:46:05
通常是通过发射光谱进行定量，就是固定激发波长，扫描不同浓度溶液的发射光谱，以其峰高处对应的相对荧光强度与浓度作标准曲线。在测定未知物的荧光强度在标准曲线上查找对应浓度。
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好久不见
2楼2010-05-27 16:40:37
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May2010

木虫 (著名写手)
annietop(金币+1):谢谢！ 2010-05-29 13:46:25
恩。没错的。就是用2楼的办法，先配系列浓度的溶液，然后做出标准曲线或者回归方程。然后再测待测溶液的荧光强度，把强度代入标准曲线中求浓度。
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人生能有几回搏？！
3楼2010-05-27 21:45:02
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dx109

铁杆木虫 (著名写手)
annietop(金币+2):谢谢回复！ 2010-05-29 13:50:28
同意楼上的说法，不过需要注意的是浓度不能太大以杜绝荧光淬灭等的影响。
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6楼2010-05-28 08:50:34
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