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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量需要3个重复样本吗
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lixiaojing1318

银虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量需要3个重复样本吗 已有8人参与

荧光定量需要3个重复样本吗，还是只要一个样品，做3个重复？
提完RNA后，需要定量到相同浓度吗？
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1楼 2011-07-19 09:07:53
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lixiaojing1318

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-07-19 13:09:50:
你说的是biological replicate 和 technical replicate，一般每个样本做三到四个技术重复，这个貌似是荧光定量必需的
生物学重复就是可以独立重复提取两三次，分别进行实验，荧光定量最好需要生物学重复～～
另 ...

您说的RNA定在一定的浓度范围内，这个大概是相差多少为好呢
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4楼2011-07-20 22:08:45
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lixiaojing1318

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lixiaojing1318 at 2011-07-20 22:08:45:
您说的RNA定在一定的浓度范围内，这个大概是相差多少为好呢

我是才开始准备做荧光定量，先做了个普通PCR，发现有引物二聚体存在，该怎么消除呢
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-20 22:11:13
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lixiaojing1318

银虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-07-30 13:14:04
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-07-19 12:45:27:
不太明白你问的问题的意思。一般来讲荧光定量每个样本都要做3个孔，这是严格来讲。不管是测RNA还是DNA当然要把浓度调成一样的，要不然这个定量就没有什么意义了。不知道你具体是做什么实验，想达到什么目的。

您好，我是做基因在不同时期样品的表达量，做的是相对定量。还有一些问题，最近小木虫修复，一直没有机会问。
1.由于我是要做多个样品，扩增效率该怎么得到？还是每个样都需要做标准曲线？
2.做完了实验，所得到的扩增曲线和溶解曲线，是不是都得单独保存?发文章时会都用到吗，还是只需要几个图就可以了？
下面是扩增曲线和溶解曲线的图，是不是CT值在30以上就不可以用？
还有溶解曲线前面有峰，是不是有引物二聚体？
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8楼2011-07-30 11:15:01
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