| 查看: 3826 | 回复: 41 | ||||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
maomao809920金虫 (小有名气)
|
[求助]
RCR自己怎么都做不出来，但是同样条件下师哥帮着做了，却出来了，求助原因
|
|||
|
最近在做PCR，新手一枚，跨专业到生物化学专业。。 师哥指导下做了PCR，之后跑了电泳，但是什么都没有。 然后师哥自己做了一遍（同样的药品、仪器、体系），电泳后就有条带了。。 之后自己又做了一遍，依旧没有，很桑心。想知道为什么。。 分析了一下，觉得应该是自己使用移液枪加样的不规范导致的，在加样的时候应该注意什么，是不是每次加样的时候，枪头都要深入至小离心管管底？ 求各位大侠指导了，是不是我操作有问题。。 先谢谢了！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有297人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 趁着火热，恳请建议！师哥师姐大牛专家们请指教！！
已经有3人回复
- CSSCI(2012-2013)终于出来了，比上一版有进步
已经有9人回复
- 溶于水的产品怎么提取出来
已经有25人回复
- 保护羟基和氨基的三甲基硅基水解条件
已经有9人回复
- 土壤的铅和镉怎么消解出来啊？越简单越好，最好不用氢氟酸
已经有11人回复
- 【讨论】pets5成绩出来了
已经有15人回复
- 【讨论】咱们2010年12月份的公共英语五级考试什么时候可以出来成绩呢？
已经有12人回复
- 浙江省自然科学基金结果出来了吗？
已经有90人回复
- 【求助】纯的石英玻璃是怎么生产出来的啊？据说是加了Na和硼？真的么？
已经有5人回复
- 【求助】这个怪异公式是如何推导出来的？
已经有9人回复
2楼2011-07-17 19:00:41
dhd997
荣誉版主 (文坛精英)
自由人，我型我秀！
- MolEPI: 5
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 4.021
- 金币: 22094.4
- 散金: 1968
- 红花: 45
- 沙发: 161
- 帖子: 22410
- 在线: 927.9小时
- 虫号: 500412
- 注册: 2008-02-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
- 管辖: 分子生物
3楼2011-07-17 20:06:51
maomao809920
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 808.6
- 散金: 55
- 红花: 2
- 帖子: 221
- 在线: 59.6小时
- 虫号: 1269422
- 注册: 2011-04-18
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
4楼2011-07-17 21:53:39
maomao809920
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 808.6
- 散金: 55
- 红花: 2
- 帖子: 221
- 在线: 59.6小时
- 虫号: 1269422
- 注册: 2011-04-18
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
5楼2011-07-17 21:58:12
zcqcau
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9904.4
- 散金: 57
- 红花: 2
- 帖子: 1384
- 在线: 40.5小时
- 虫号: 864634
- 注册: 2009-10-07
- 专业: 植物化学保护
6楼2011-07-18 00:36:48
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-18 12:46:32
dhd997(EPI+1): 没仔细看 2011-07-18 12:47:24
dhd997(金币+5): good 2011-07-18 12:46:32
dhd997(EPI+1): 没仔细看 2011-07-18 12:47:24
|
新手呀，没有做出来很正常的；慢慢来就可以很随意的； PCR这个东西呢，首先你得先搞清楚原理是什么，就是体系中各个样品是干什么的，这个必须清楚，不要等做过很多PCR了，才发现里面什么东西是干什么的都不知道，就悲催了； 首先呢，体系呢，小到10ul，大到100--200都有的，不同目的，不一样的体系； 体系中有什么呢？去离子水 模板 引物（sense antisense） 酶 Buffer dNTP 一般就这六种，有时候还会添加甘油，DMSO KCL； 还有就是操作的时候，一定要细心认真，因为加的量都比较小，所以要用准确一点的移液枪，稍有不慎就会多加或者少加，所以这一步很重要滴； 下来就是程序的设计了，主要需要注意的是退火温度和延伸时间的选择了，不同目的不一样的，慢慢做就会很随意的。 加油！祝福ing  |
7楼2011-07-18 12:45:06
8楼2011-07-18 14:13:15
9楼2011-07-18 14:45:15
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！不改专家本色哦！ 2011-07-19 16:31:05
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！不改专家本色哦！ 2011-07-19 16:31:05
|
同样的条件，熟练的人可以做出来，生手不一定能做的出来，对于新手来说，一般都是加样的问题，很难将少至于0.几ul 的样品加准确，这个最好用移液枪吸水打到PCR管中来联系，在熟练人员的指导下，看0.2ul在枪头什么位置，0.5ul在枪头什么位置，2ul在枪头什么位置（一般来说，同样型号的枪头规格差别不大）相同体积的液体所在枪头的位置大致相同，这样吸取多少样做到心中有数，拿移液枪时，右手拿枪，左手的食指或中指（一个指头就可以）轻轻压着移液枪的中部位置（大概位置）这样加样的时候在2个手的作用下会更平衡些，加到PCR管中的时候轻轻的靠近管壁打下去，使打下去的液体成为一个点，每次加样的时候，在靠近上次加样（那个液体点）附近再打下去也是一个点，点与点之间保持一定的距离，这样你加几个样就会有几个点，不会使你混乱的，最后加水的时候可以把各个点稍微冲下去就好了，点动离心一下液体都会下去混匀了。新手要多练加样技术，可以拿空白的水作为PCR的各种成分加样，多多练习必然会熟练的。 |
10楼2011-07-18 20:55:03
20