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maomao809920

金虫 (小有名气)

[求助] RCR自己怎么都做不出来,但是同样条件下师哥帮着做了,却出来了,求助原因

最近在做PCR,新手一枚,跨专业到生物化学专业。。
师哥指导下做了PCR,之后跑了电泳,但是什么都没有。
然后师哥自己做了一遍(同样的药品、仪器、体系),电泳后就有条带了。。
之后自己又做了一遍,依旧没有,很桑心。想知道为什么。。

分析了一下,觉得应该是自己使用移液枪加样的不规范导致的,在加样的时候应该注意什么,是不是每次加样的时候,枪头都要深入至小离心管管底?

求各位大侠指导了,是不是我操作有问题。。

先谢谢了!
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by dhd997 at 2011-07-17 20:06:51:
量少,不会没加进去吧

我觉得也是。。但是都离心了,应该也会沉淀下去吧。。。
4楼2011-07-17 21:53:39
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by green1223 at 2011-07-17 19:00:41:
加DNA模板时,把枪头深入底部 吸打几次再加入就没问题了

还要什么要注意的没?呵呵呵~~求教
5楼2011-07-17 21:58:12
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by btx362237729 at 2011-07-19 09:29:37:
貌似主要是移液枪的操作规范问题。。。枪头里面不要有残留

我也觉得是这个问题 其他方面还真找不到有什么问题
13楼2011-07-19 09:49:28
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by beautybanana at 2011-07-18 20:55:03:
同样的条件,熟练的人可以做出来,生手不一定能做的出来,对于新手来说,一般都是加样的问题,很难将少至于0.几ul 的样品加准确,这个最好用移液枪吸水打到PCR管中来联系,在熟练人员的指导下,看0.2ul在枪头什 ...

不错!好好学习下,回头拿水练练。

加样时是不是最好打到管底,然后和其他样吸打混匀比较好啊?
14楼2011-07-19 09:55:46
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by zcqcau at 2011-07-18 00:36:48:
应该说PCR是最简单的操作了,应该说这个的确有不稳定性因素和运气在里面,但是我觉得主要还是熟能生巧,现在我们都用PCR Mixture 更加简单了,希望你能找点相关试剂盒 PCR mixture 相信能给你带来不少的方便

毕竟才做了2次PCR。。还需多锻炼。。哈哈
15楼2011-07-19 10:02:06
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by guoting329 at 2011-07-18 20:57:59:
我也遇到同样的问题,连接转化重复了几遍就是做不出来,可师姐一做就出来了,也是极其的郁闷!!

呵呵 ,一起学习吧。
16楼2011-07-19 10:02:45
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maomao809920

金虫 (小有名气)

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Originally posted by 天使托 at 2011-07-18 12:45:06:
新手呀,没有做出来很正常的;慢慢来就可以很随意的;
PCR这个东西呢,首先你得先搞清楚原理是什么,就是体系中各个样品是干什么的,这个必须清楚,不要等做过很多PCR了,才发现里面什么东西是干什么的都不知道, ...

谢谢了先~

师哥也说这很正常,不过对于刚做实验的我,还是很桑心滴。郁闷了一晚上,这么初级的实验都做做不出,快怀疑我的智商了,嘎嘎。
17楼2011-07-19 10:05:45
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maomao809920

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-07-19 11:15:25:
打到管壁下部即可 使你打下的液体成为一个小点滴~ 每个样都这样加 最后短暂离心甩下液体即可

谢谢帮助~
21楼2011-07-20 10:23:56
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maomao809920

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-07-18 20:55:03:
同样的条件,熟练的人可以做出来,生手不一定能做的出来,对于新手来说,一般都是加样的问题,很难将少至于0.几ul 的样品加准确,这个最好用移液枪吸水打到PCR管中来联系,在熟练人员的指导下,看0.2ul在枪头什 ...

小离心管都插在冰里面,加样时可以拿出来加样么?会有影响吗?
22楼2011-07-20 10:27:59
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