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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-18 12:46:32
dhd997(EPI+1): 没仔细看 2011-07-18 12:47:24
新手呀,没有做出来很正常的;慢慢来就可以很随意的;
PCR这个东西呢,首先你得先搞清楚原理是什么,就是体系中各个样品是干什么的,这个必须清楚,不要等做过很多PCR了,才发现里面什么东西是干什么的都不知道,就悲催了;

首先呢,体系呢,小到10ul,大到100--200都有的,不同目的,不一样的体系;
体系中有什么呢?去离子水 模板 引物(sense antisense) 酶 Buffer dNTP 一般就这六种,有时候还会添加甘油,DMSO KCL;

还有就是操作的时候,一定要细心认真,因为加的量都比较小,所以要用准确一点的移液枪,稍有不慎就会多加或者少加,所以这一步很重要滴;

下来就是程序的设计了,主要需要注意的是退火温度和延伸时间的选择了,不同目的不一样的,慢慢做就会很随意的。

加油!祝福ing
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-07-18 12:45:06
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good!不改专家本色哦! 2011-07-19 16:31:05
引用回帖:
Originally posted by maomao809920 at 2011-07-17 16:05:42:
最近在做PCR,新手一枚,跨专业到生物化学专业。。
师哥指导下做了PCR,之后跑了电泳,但是什么都没有。
然后师哥自己做了一遍(同样的药品、仪器、体系),电泳后就有条带了。。
之后自己又做了一遍,依旧没有 ...

同样的条件,熟练的人可以做出来,生手不一定能做的出来,对于新手来说,一般都是加样的问题,很难将少至于0.几ul 的样品加准确,这个最好用移液枪吸水打到PCR管中来联系,在熟练人员的指导下,看0.2ul在枪头什么位置,0.5ul在枪头什么位置,2ul在枪头什么位置(一般来说,同样型号的枪头规格差别不大)相同体积的液体所在枪头的位置大致相同,这样吸取多少样做到心中有数,拿移液枪时,右手拿枪,左手的食指或中指(一个指头就可以)轻轻压着移液枪的中部位置(大概位置)这样加样的时候在2个手的作用下会更平衡些,加到PCR管中的时候轻轻的靠近管壁打下去,使打下去的液体成为一个点,每次加样的时候,在靠近上次加样(那个液体点)附近再打下去也是一个点,点与点之间保持一定的距离,这样你加几个样就会有几个点,不会使你混乱的,最后加水的时候可以把各个点稍微冲下去就好了,点动离心一下液体都会下去混匀了。新手要多练加样技术,可以拿空白的水作为PCR的各种成分加样,多多练习必然会熟练的。
10楼2011-07-18 20:55:03
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