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maomao809920

金虫 (小有名气)

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[求助] RCR自己怎么都做不出来，但是同样条件下师哥帮着做了，却出来了，求助原因

最近在做PCR，新手一枚，跨专业到生物化学专业。。
师哥指导下做了PCR，之后跑了电泳，但是什么都没有。
然后师哥自己做了一遍（同样的药品、仪器、体系），电泳后就有条带了。。
之后自己又做了一遍，依旧没有，很桑心。想知道为什么。。

分析了一下，觉得应该是自己使用移液枪加样的不规范导致的，在加样的时候应该注意什么，是不是每次加样的时候，枪头都要深入至小离心管管底？

求各位大侠指导了，是不是我操作有问题。。

先谢谢了！

回复此楼

1楼2011-07-17 16:05:42

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beautybanana

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！不改专家本色哦！ 2011-07-19 16:31:05

引用回帖:

Originally posted by maomao809920 at 2011-07-17 16:05:42:
最近在做PCR，新手一枚，跨专业到生物化学专业。。
师哥指导下做了PCR，之后跑了电泳，但是什么都没有。
然后师哥自己做了一遍（同样的药品、仪器、体系），电泳后就有条带了。。
之后自己又做了一遍，依旧没有 ...

同样的条件，熟练的人可以做出来，生手不一定能做的出来，对于新手来说，一般都是加样的问题，很难将少至于0.几ul 的样品加准确，这个最好用移液枪吸水打到PCR管中来联系，在熟练人员的指导下，看0.2ul在枪头什么位置，0.5ul在枪头什么位置，2ul在枪头什么位置（一般来说，同样型号的枪头规格差别不大）相同体积的液体所在枪头的位置大致相同，这样吸取多少样做到心中有数，拿移液枪时，右手拿枪，左手的食指或中指（一个指头就可以）轻轻压着移液枪的中部位置（大概位置）这样加样的时候在2个手的作用下会更平衡些，加到PCR管中的时候轻轻的靠近管壁打下去，使打下去的液体成为一个点，每次加样的时候，在靠近上次加样（那个液体点）附近再打下去也是一个点，点与点之间保持一定的距离，这样你加几个样就会有几个点，不会使你混乱的，最后加水的时候可以把各个点稍微冲下去就好了，点动离心一下液体都会下去混匀了。新手要多练加样技术，可以拿空白的水作为PCR的各种成分加样，多多练习必然会熟练的。