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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RCR自己怎么都做不出来，但是同样条件下师哥帮着做了，却出来了，求助原因
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maomao809920

金虫 (小有名气)

[求助] RCR自己怎么都做不出来，但是同样条件下师哥帮着做了，却出来了，求助原因

最近在做PCR，新手一枚，跨专业到生物化学专业。。
师哥指导下做了PCR，之后跑了电泳，但是什么都没有。
然后师哥自己做了一遍（同样的药品、仪器、体系），电泳后就有条带了。。
之后自己又做了一遍，依旧没有，很桑心。想知道为什么。。

分析了一下，觉得应该是自己使用移液枪加样的不规范导致的，在加样的时候应该注意什么，是不是每次加样的时候，枪头都要深入至小离心管管底？

求各位大侠指导了，是不是我操作有问题。。

先谢谢了！
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1楼 2011-07-17 16:05:42
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-18 12:46:32
dhd997(EPI+1): 没仔细看 2011-07-18 12:47:24
新手呀，没有做出来很正常的；慢慢来就可以很随意的；
PCR这个东西呢，首先你得先搞清楚原理是什么，就是体系中各个样品是干什么的，这个必须清楚，不要等做过很多PCR了，才发现里面什么东西是干什么的都不知道，就悲催了；

首先呢，体系呢，小到10ul，大到100--200都有的，不同目的，不一样的体系；
体系中有什么呢？去离子水 模板 引物（sense antisense） 酶 Buffer dNTP 一般就这六种，有时候还会添加甘油，DMSO KCL；

还有就是操作的时候，一定要细心认真，因为加的量都比较小，所以要用准确一点的移液枪，稍有不慎就会多加或者少加，所以这一步很重要滴；

下来就是程序的设计了，主要需要注意的是退火温度和延伸时间的选择了，不同目的不一样的，慢慢做就会很随意的。

加油！祝福ing
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-07-18 12:45:06
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green1223

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

maomao809920(金币+2): 谢谢~ 2011-07-17 21:51:31
加DNA模板时，把枪头深入底部 吸打几次再加入就没问题了
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2楼2011-07-17 19:00:41
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主

【答案】应助回帖

量少，不会没加进去吧
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
3楼2011-07-17 20:06:51
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maomao809920

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2011-07-17 20:06:51:
量少，不会没加进去吧

我觉得也是。。但是都离心了，应该也会沉淀下去吧。。。
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4楼2011-07-17 21:53:39
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