24小时热门版块排行榜    

查看: 1999  |  回复: 7
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

blueghost006

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何进一步纯化这个蛋白?

最近在纯化一个蛋白~~但是总是会有杂带啊~~~~不知道有什么方法可以将那些讨厌的杂带给弄掉~~~~另外,我纯化出来去打抗体的~~~不知道就以这样的水平可以打么?PS:最亮的是我的目的条带~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流,欢迎常来 2011-07-17 20:47:43
镍柱效果再差,也不是这个纯度啊。
镍柱最好不用ph梯度。
用咪唑梯度来洗会好得多。
我的经验,一般25-50mM的浓度可以把90%以上的杂带去掉。
你可以用25mM咪唑洗一下,50mM咪唑洗一下,然后直接500mM咪唑洗。
ph恒定不变。
绝对没问题。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
7楼2011-07-17 19:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zhougama

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2011-07-16 15:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以利用TAP技术进行蛋白纯化,你搜下网上很多介绍的
3楼2011-07-16 15:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost006

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by zhougama at 2011-07-16 15:00:04:
你总得简单介绍下你的纯化方法以及你这种蛋白质的某些性质吧,不然我们如何知道!

我的那个蛋白是一个全蛋白的N端,与Trx融合,PET32作为载体,在BL21中表达,然后过Ni柱,先用6M~1M的尿素复性,然后用咪唑洗脱,先用20mM的PH=7.5的咪唑洗脱,再用20mM/PH=6.0咪唑洗脱,最后用500mM/PH=8.0的咪唑洗下目的蛋白,不知道各位大虾有什么意见?
4楼2011-07-17 13:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 7/350 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见