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blueghost006

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[求助] 如何进一步纯化这个蛋白？

最近在纯化一个蛋白~~但是总是会有杂带啊~~~~不知道有什么方法可以将那些讨厌的杂带给弄掉~~~~另外，我纯化出来去打抗体的~~~不知道就以这样的水平可以打么？PS：最亮的是我的目的条带~~~~

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1楼2011-07-16 10:29:06

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冼亮淀粉酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-17 19:11:45

镍柱虽然说也是亲和层析，但是宿主菌可能有的蛋白质里的组氨酸是连着有两个或者3个的，也可以被吸附。你的洗脱梯度pH值变来变去的，结果通过改变pH值的方法不能达到纯化，那就试一下改变咪唑梯度。一般来说20毫摩尔是洗去完全不能结合的蛋白质，后面可以用50、100、150、200、250，这些梯度可以逐渐把非目的蛋白质洗去。在这个过程中可能有两个或者3个梯度都有目的蛋白质被洗脱，但是其中有一个梯度是目的蛋白质最多的，在这些梯度中，可能有一个梯度含有杂带最少。最后的500毫摩尔是把蛋白质全都洗掉的，可以保留这个梯度。

你先试一下咪唑梯度，应该会有更纯的蛋白质，但是如果用来做抗原就要更加纯了，你现在的纯度是不可能的。

如果还不纯就再试一下其它纯化方法，例如离子交换层析和疏水层析。如果还不行，盐析和有机溶剂沉淀也可以考虑一下，不过就稍微麻烦些。