| 查看: 1737 | 回复: 7 | ||||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
blueghost006新虫 (初入文坛)
|
[求助]
如何进一步纯化这个蛋白？
|
|||
最近在纯化一个蛋白~~但是总是会有杂带啊~~~~不知道有什么方法可以将那些讨厌的杂带给弄掉~~~~另外，我纯化出来去打抗体的~~~不知道就以这样的水平可以打么？PS：最亮的是我的目的条带~~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
281求调剂（0805）
已经有8人回复
-
环境领域全国重点实验室招收博士1-2名
已经有3人回复
-
材料专硕306英一数二
已经有10人回复
-
301求调剂
已经有6人回复
-
一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂
已经有7人回复
-
302求调剂
已经有6人回复
-
26博士申请
已经有3人回复
-
268求调剂
已经有3人回复
-
311求调剂
已经有10人回复
-
被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 蛋白质固定吸附与蛋白质分离纯化的区别
已经有9人回复
- 蛋白纯化怎么去除核酸
已经有14人回复
- gst标签，蛋白纯化
已经有25人回复
- 纯化后的蛋白做western，出现很明显的两条带，请问是二聚体吗？怎么打开成单体？
已经有11人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】这样的情况应该如何选择进一步的纯化步骤？
已经有4人回复
- 【求助/交流】大家做蛋白纯化的都到什么型号柱子，效果怎么样呢
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于蛋白纯化
已经有30人回复
- 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急
已经有15人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19454.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6586
- 在线: 2777.2小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-17 19:11:45
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-17 19:11:45
|
镍柱虽然说也是亲和层析，但是宿主菌可能有的蛋白质里的组氨酸是连着有两个或者3个的，也可以被吸附。你的洗脱梯度pH值变来变去的，结果通过改变pH值的方法不能达到纯化，那就试一下改变咪唑梯度。一般来说20毫摩尔是洗去完全不能结合的蛋白质，后面可以用50、100、150、200、250，这些梯度可以逐渐把非目的蛋白质洗去。在这个过程中可能有两个或者3个梯度都有目的蛋白质被洗脱，但是其中有一个梯度是目的蛋白质最多的，在这些梯度中，可能有一个梯度含有杂带最少。最后的500毫摩尔是把蛋白质全都洗掉的，可以保留这个梯度。 你先试一下咪唑梯度，应该会有更纯的蛋白质，但是如果用来做抗原就要更加纯了，你现在的纯度是不可能的。 如果还不纯就再试一下其它纯化方法，例如离子交换层析和疏水层析。如果还不行，盐析和有机溶剂沉淀也可以考虑一下，不过就稍微麻烦些。 |
6楼2011-07-17 17:32:34
