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alicejie2005

银虫 (小有名气)

[求助] 想问一下关于rt-qPCR的问题

我做的实验是基因相对定量，18S做内参，现在做完反转录，正打算做荧光定量PCR，但是不知道是不是应该做标准曲线，也不知道应该用哪种相对定量方法，不过看到许多文献上都是用的2-△△CT。我现在是不是应该用我的cDNA稀释后做18S的标准曲线，然后就可以直接做目的基因的PCR了呢？刚开始实验，有许多不懂要请教的地方，有经验的人支支招呗，非常感谢
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1楼 2011-07-10 07:37:27
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎讨论 2011-07-10 09:17:44
引用回帖:
Originally posted by kfh2008 at 2011-07-10 08:52:00:
应该做标准曲线的。建议做管家基因，对比着做，这样最终结果比较准确。

做相对定量不用做标准曲线吧？做绝对定量才用，相对定量只要有对照组和内参就可以了，不是吗？
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2011-07-10 09:00:26
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kfh2008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 经验之谈？ 2011-07-10 09:17:28
引用回帖:
Originally posted by alicejie2005 at 2011-07-10 07:37:27:
我做的实验是基因相对定量，18S做内参，现在做完反转录，正打算做荧光定量PCR，但是不知道是不是应该做标准曲线，也不知道应该用哪种相对定量方法，不过看到许多文献上都是用的2-△△CT。我现在是不是应该用我的c ...

应该做标准曲线的。建议做管家基因，对比着做，这样最终结果比较准确。
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2楼2011-07-10 08:52:00
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倔强的投手

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-10 17:37:58
做相对定量不用做标准曲线
当然你做标准曲线的话可以看看你引物的扩增效率
如果是单纯就看相对定量，可以不做，没问题的
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-10 09:41:58
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