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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于质粒构建
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[求助] 关于质粒构建

如果构建一个重组质粒，P插入片段时上游多P了100多bp，这样的话就有可能带有基因本身的启动子，请问这样，在质粒的启动子后面还有一个启动子会不会对转录翻译有影响？谢谢！
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1楼 2011-07-05 15:05:12
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-07-06 07:41:48
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-05 17:09:15:
在转录过程中，启动子的起始位点募集RNA聚合酶II，分子量 480,000，
在翻译过程中，启动子起始位点募集核糖体，核糖体（80s+60s+40s=8,000,000）
所以，尤其是核糖体具有一定的空间位阻，如果前面一个启动子募集 ...

在翻译过程中，核糖体
1，原核核糖体30s小亚基识别结合序列为SD序列，与核糖体的16srRNA富含嘌呤碱基序列结合，一般位于其实密码子上游10个碱基左右的位置。这种SD序列已经被证实是细菌中识别起始密码子的主要机制。（生物化学，王镜岩，第三版下册p527）质量2500kda
2，真核核糖体40s小亚基识别结合5'帽子结构，经过序列扫描机制，遇到第一个AUG起始合成。（细胞生物学，翟中和第三版p377）质量4800kda
3，关于空间位阻。核糖体25-30nm，碱基堆积为0.34nm，30nm可以占据将近100个核苷酸，但是其实未必。由此不能断定空间位阻影响第二个起始密码子正确起始（两个启动子间距100bp）。
4，如果以第一个启动子启动，后面第一个AUG很可能成为起始密码子，翻译蛋白有2/3的几率是移码。
5，关于质粒的增强序列。确实有质粒含有增强子，增强连锁基因的转录。但最初的质粒一般是难以控制复制数和转录量，现在经过改造的质粒多是以诱导表达型、组成型表达等类型加以控制。
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4楼2011-07-05 21:08:55
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wwdxx2004(金币+15): 非常感谢 很受益！ 2011-07-05 17:35:08
dhd997(金币+5): good 2011-07-05 19:15:34
在转录过程中，启动子的起始位点募集RNA聚合酶II，分子量 480,000，
在翻译过程中，启动子起始位点募集核糖体，核糖体（80s+60s+40s=8,000,000）
所以，尤其是核糖体具有一定的空间位阻，如果前面一个启动子募集能力强的话，核糖体先在前面一个启动子结合，后面的由于有空间位阻的情况下，第二个启动子很大几率不能起作用。如果后面一个强的话，第一个启动子将不能结合核糖体。

通常情况下，质粒上面有较强的增强原件，该启动子的活性应该比你后面加入的启动子活性强，所以，后面一个启动子不会起作用
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2楼2011-07-05 17:09:15
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
1949stone(金币+1): 很坚决啊 2011-07-05 19:45:54
没有任何影响的！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-05 18:30:54
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