应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教二维电泳高手，如回答的好，另有重赏！！！！
51/1返回列表
查看: 1826  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

qingtingzhe

银虫 (正式写手)

步行者

[求助] 请教二维电泳高手，如回答的好，另有重赏！！！！

我现在做一株红球菌二维电泳，研究其受多环芳烃诱导的差异蛋白，通过差异蛋白寻找降解多环芳烃的降解基因。现在遇到一些问题：
   （1）超声破碎的功率和时间选择。由于红球菌是革兰氏阳性菌，破壁比较难，条件怎样选择？
   （2）影响蛋白样品制备的因素有哪些？有哪些注意事项，例如怎么除盐，怎么尽量减少蛋白的损失。
  （3）下面是我从文献中看到的方法，请提些建议：
（1）收集菌体。
（2）超声破碎。
（3）除去细胞碎屑和DNA。通过一步加入精胺，290000g高速离心。
（4）通过透析除去无机盐和小分子物质。
（5）-20度保存。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人的上半生不要犹豫，下半生不要后悔
1楼 2011-07-05 12:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superboring

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

qingtingzhe(金币+10): 对我有些启发,谢谢了 2011-07-07 20:47:22
建议使用frenchpress 或者 beadbeator， 对细胞膜与细胞壁的破碎比较彻底均匀。
先用低速离心去除其他杂质，使用超速离心容易分离膜蛋白与细胞质蛋白。
透析除盐，建议使用minicassette 透析膜，可以最少透析0。5ml的量
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-07 16:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

qingtingzhe(金币+1): 2011-07-06 08:45:53
Perfect-FOCUS™(786-124)
2D电泳样品清除试剂
赞一下 回复此楼
2楼2011-07-06 00:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangqi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qingtingzhe(金币+10): 两个超声的间隔要多久？ 2011-07-07 09:24:10
1.可以先用液氮研磨再超声，可能效果好些。我现在是直接研磨后用Tris-HCl提取。以前的超声条件：（200,5,5,8,）超声两次。
2.丙酮洗涤除盐的效果还不错，但是蛋白的损失好像有点大。减少蛋白损失的方法就是尽量用最少的步骤，因为，每一步，都可能把想要的蛋白损失了。
仅供参考~~~
赞一下 回复此楼
人生，只有坚强，才能美好！
3楼2011-07-06 09:42:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingtingzhe

银虫 (正式写手)

步行者
引用回帖:
Originally posted by yangqi at 2011-07-06 09:42:42:
1.可以先用液氮研磨再超声，可能效果好些。我现在是直接研磨后用Tris-HCl提取。以前的超声条件：（200,5,5,8,）超声两次。
2.丙酮洗涤除盐的效果还不错，但是蛋白的损失好像有点大。减少蛋白损失的方法就是尽量用 ...

请教你几个问题：
   1  两次超声的时间间隔多久？
   2  不知你用过超高速离心（290000g）吗？他能很好的出去杂质吗 ？
   3 透析除盐，效果怎样？我的蛋白不太多，会不会粘在膜上，造成蛋白损耗。

     劳驾了
赞一下 回复此楼
人的上半生不要犹豫，下半生不要后悔
4楼2011-07-07 09:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-18 4/200 2026-03-21 08:25 by laoshidan
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +13 曦熙兮 2026-03-15 13/650 2026-03-20 19:35 by Dream007008
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭