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qingtingzhe

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[求助] 请教二维电泳高手，如回答的好，另有重赏！！！！

我现在做一株红球菌二维电泳，研究其受多环芳烃诱导的差异蛋白，通过差异蛋白寻找降解多环芳烃的降解基因。现在遇到一些问题：
（1）超声破碎的功率和时间选择。由于红球菌是革兰氏阳性菌，破壁比较难，条件怎样选择？
（2）影响蛋白样品制备的因素有哪些？有哪些注意事项，例如怎么除盐，怎么尽量减少蛋白的损失。
（3）下面是我从文献中看到的方法，请提些建议：
（1）收集菌体。
（2）超声破碎。
（3）除去细胞碎屑和DNA。通过一步加入精胺，290000g高速离心。
（4）通过透析除去无机盐和小分子物质。
（5）-20度保存。

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1楼 2011-07-05 12:15:07

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qingtingzhe

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引用回帖:

Originally posted by yangqi at 2011-07-06 09:42:42:
1.可以先用液氮研磨再超声，可能效果好些。我现在是直接研磨后用Tris-HCl提取。以前的超声条件：（200,5,5,8,）超声两次。
2.丙酮洗涤除盐的效果还不错，但是蛋白的损失好像有点大。减少蛋白损失的方法就是尽量用 ...

请教你几个问题：
1  两次超声的时间间隔多久？
2  不知你用过超高速离心（290000g）吗？他能很好的出去杂质吗？
3 透析除盐，效果怎样？我的蛋白不太多，会不会粘在膜上，造成蛋白损耗。

   劳驾了