应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真菌ITS序列PCR扩增 求助
21/1返回列表
查看: 7444  |  回复: 9
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 真菌ITS序列PCR扩增 求助

提取到土壤DNA后进行真菌ITS序列PCR扩增，用的引物是ITS1F/ITS4R
做了温度梯度PCR，退火温度从45℃——65℃，检测结果显示，非特异性条带多，目的产物产量不高，见下图
该如何优化PCR体系和程序？请各位虫友提供宝贵意见，先谢谢啦！
PCR体系：
总体积               30
10×buffer                      3
dNTP                             1.5
引物                  1
taq EX                             0.3
BSA                                 0.2
模板                   1
水                     22

程序：
94℃             4min
94℃             1min
45℃~65℃   45s
72℃             90s
72℃             10min
32个循环
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

土壤真菌 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
以马内利！
1楼 2011-07-02 22:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nuraliya

新虫 (初入文坛)
你们好！我最近做了真菌PCR，用的是ITS1和4，但是PCR结果重叠峰，这怎么回事儿？该怎么办，帮我解决一下亲爱的们。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-12-04 17:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bear0329 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭