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急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-01 01:52:39
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-01 01:52:39
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(1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基，30 o C培养12 h； (2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中，30 o C培养8 h， 使菌体达到同步生长状态； (3)将酵母培养物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min离心5 min收集菌体； (4)弃上清，加入已预冷的15 mL超纯水洗涤菌体一次； (5)6,000 r/min离心5 min收集菌体，用15 mL 1 mol/L山梨醇重复洗涤菌体三次； (6)离心收集菌体，加入200μL 1 mol/L山梨醇重悬浮菌体，取200μL的菌悬液至1.5 mL 离心管中； (7)在制得的菌悬液中加入20μL(≤5μg)待转化的质粒或DNA片段，轻轻混匀后冰浴 10 min； (8)将冰浴后的菌悬液转入已预冷的电转杯中，1,500 V电击5 ms； (9)加入适量体积的1 mol/L山梨醇将电转后的菌悬液从电转杯中洗出，取200μL涂布 相应的抗性平板； (10)30度培养3-5天挑选转化子。 |
2楼2011-06-30 21:28:08
3楼2011-07-01 09:40:05
4楼2011-07-01 10:50:06
5楼2013-07-06 09:54:56
6楼2014-04-11 19:01:02
Neo2000
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7楼2014-04-11 20:15:10
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Neo2000
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