| 查看: 4604 | 回复: 13 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
|
||
| 急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和电转化方法，不胜感激 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
淡水生烟» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有267人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于毕赤酵母电转化
已经有10人回复
- 求助一个关于酿酒酵母转化的问题
已经有19人回复
- 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题
已经有8人回复
- 酿酒酵母转化建立突变库
已经有13人回复
- 重组酿酒酵母转化子筛选的问题
已经有12人回复
- 亲们~谁做过酿酒酵母的转化，怎么筛选阳性克隆呢？
已经有5人回复
- 求助：毕赤酵母电转化
已经有5人回复
- 求助毕赤酵母电转化问题
已经有6人回复
- 求助：毕氏酵母GS115感受态细胞的制备及转化方法
已经有5人回复
- 【分享】农杆菌感受态制备和转化方法
已经有19人回复
- 【求助/交流】质粒转化枯草杆菌感受态原理
已经有4人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】求助：酵母感受态细胞的制备
已经有9人回复
4楼2011-07-01 10:50:06
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-01 01:52:39
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-01 01:52:39
|
(1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基，30 o C培养12 h； (2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中，30 o C培养8 h， 使菌体达到同步生长状态； (3)将酵母培养物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min离心5 min收集菌体； (4)弃上清，加入已预冷的15 mL超纯水洗涤菌体一次； (5)6,000 r/min离心5 min收集菌体，用15 mL 1 mol/L山梨醇重复洗涤菌体三次； (6)离心收集菌体，加入200μL 1 mol/L山梨醇重悬浮菌体，取200μL的菌悬液至1.5 mL 离心管中； (7)在制得的菌悬液中加入20μL(≤5μg)待转化的质粒或DNA片段，轻轻混匀后冰浴 10 min； (8)将冰浴后的菌悬液转入已预冷的电转杯中，1,500 V电击5 ms； (9)加入适量体积的1 mol/L山梨醇将电转后的菌悬液从电转杯中洗出，取200μL涂布 相应的抗性平板； (10)30度培养3-5天挑选转化子。 |
2楼2011-06-30 21:28:08
3楼2011-07-01 09:40:05
5楼2013-07-06 09:54:56
