应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
51/1返回列表
查看: 4735  |  回复: 18
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教已有14人参与

昨晚镍柱纯化两个蛋白（脂肪酶），上样量为20ml镍柱纯化1L菌液破碎上清（80ml），最后用50ml  500mM咪唑（50mM Tris·Hcl，0.5mM Nacl，10%甘油  ）洗脱，透析：（1）50mM Tris·Hcl，0.2mM Nacl  3L 透析3h，开始出现沉淀；（2）50mM Tris·Hcl，0.03mM Nacl，3L透析不到1h，就出现比较多的沉淀了，7h后出现大量沉淀。透析一直在4℃下搅拌进行。请教各位高手，是我蛋白变性太快了还是透析过程中什么因素引起的，谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 蛋白表达纯化与检测

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jinpeng_6118

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人生百态原为海，看破红尘方为岸！
1楼2011-06-30 10:31:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-07-05 12:18:35
脱盐很快的，而且容积变化不大，最多为原来的三倍，我做的时候是1.5倍。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2011-07-04 16:57:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+3): 鼓励回答 2011-06-30 15:58:51
兄弟，搞错没有，是0.5mM， 0.2mM 的NaCl 还是0.5M，0.2M。。。。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-06-30 14:46:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-06-30 15:59:03
很怪异，500mM那么高的咪唑洗脱，只洗了2.5倍柱床体积。0.03mM Nacl那么低，我怀疑是30mM。不过可能楼主的实验就是要求这样的。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-06-30 15:01:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

toxicpeach

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+4): 鼓励回答 2011-06-30 15:59:12
silicare(EPI+1): 2011-07-05 12:17:08
像楼上讲的一样，你的NaCl浓度不对吧。另外，作为保护剂的甘油不能一次透析掉，最好配几个梯度的缓冲液，NaCl和甘油的浓度逐步缓慢降低，一般要换3-4次液体，就是说你可以配置4个梯度左右。溶液成分不能变得太剧烈了。咪唑浓度变化剧烈有没有影响我就不清楚了，要是觉得透析的方法不好的话就用脱盐柱或者超滤的方法换液要稍微温和一些。
赞一下(4人) 回复此楼
海纳百川有容乃大，壁立千尺无欲则刚
4楼2011-06-30 15:26:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭