24小时热门版块排行榜    

查看: 5903  |  回复: 18
本帖产生 2 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀,请教 已有14人参与

昨晚镍柱纯化两个蛋白(脂肪酶),上样量为20ml镍柱纯化1L菌液破碎上清(80ml),最后用50ml  500mM咪唑(50mM Tris·Hcl,0.5mM Nacl,10%甘油  )洗脱,透析:(1)50mM Tris·Hcl,0.2mM Nacl  3L 透析3h,开始出现沉淀;(2)50mM Tris·Hcl,0.03mM Nacl,3L透析不到1h,就出现比较多的沉淀了,7h后出现大量沉淀。透析一直在4℃下搅拌进行。请教各位高手,是我蛋白变性太快了还是透析过程中什么因素引起的,谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 蛋白表达纯化与检测

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

人生百态原为海,看破红尘方为岸!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-06-30 15:59:03
很怪异,500mM那么高的咪唑洗脱,只洗了2.5倍柱床体积。0.03mM Nacl那么低,我怀疑是30mM。不过可能楼主的实验就是要求这样的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-06-30 15:01:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
看天(金币+3): 鼓励回答 2011-06-30 15:58:51
兄弟,搞错没有,是0.5mM, 0.2mM 的NaCl 还是0.5M,0.2M。。。。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-06-30 14:46:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

toxicpeach

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
看天(金币+4): 鼓励回答 2011-06-30 15:59:12
silicare(EPI+1): 2011-07-05 12:17:08
像楼上讲的一样,你的NaCl浓度不对吧。另外,作为保护剂的甘油不能一次透析掉,最好配几个梯度的缓冲液,NaCl和甘油的浓度逐步缓慢降低,一般要换3-4次液体,就是说你可以配置4个梯度左右。溶液成分不能变得太剧烈了。咪唑浓度变化剧烈有没有影响我就不清楚了,要是觉得透析的方法不好的话就用脱盐柱或者超滤的方法换液要稍微温和一些。
海纳百川有容乃大,壁立千尺无欲则刚
4楼2011-06-30 15:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
Nacl的终浓度为0.5mM, 0.2mM 。我是怕后几次换透析液Na+浓度高了透析效果不好,所以就把Nacl降的很低 了。问下脱盐柱的效果怎么样,正在考虑要买呢
  透析沉淀最多的那个样品离心后测了下酶活反应,活性还是挺高的。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

人生百态原为海,看破红尘方为岸!
5楼2011-06-30 18:53:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +7 羊腰板 2026-08-21 7/350 2026-08-21 21:28 by iwuli
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 14/700 2026-08-21 16:51 by applepetty
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见