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snoopyzxx木虫 (著名写手)
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酵母表达，为什么表达不出来？
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最近做一个蛋白的毕赤酵母表达，具体过程如下： A、将种子菌液20ul接种至5ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜。 B．取2.5ml至250ml BMGY培养基中（1%），30℃培养至OD600值5左右. C、5000rpm离心5min，去上清，加入BMMY培养基重悬，使OD600等于1（实为0.89左右）. D、30℃诱导培养，每隔24小时补加甲醇，使其终浓度为0.5%（我是以24小时甲醇全部消耗光来看的，所以补加0.5%的甲醇）。 E、30℃，诱导72h。 F、离心，取上清，补加适量缓冲后，0.45um过滤，纯化。 结果，GST纯化，纯化出来，只看到gst标签大小的蛋白，比目的蛋白小20多KD。 想问下大家，我的这个过程有没有什么问题？ |
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3楼2011-06-27 22:58:27