| 查看: 917 | 回复: 2 | ||
lilirong2009铜虫 (小有名气)
|
[求助]
细菌基因组DNA提取问题
|
|
1.挑单菌落于3ml培养基中，37℃过夜培养 2.取3ml菌液于EP管中8000rmp/min离心2min，收集菌体。 3、加100ulTE重悬菌体（仪器：漩涡振荡器）8000 rpm/min离心 2min。 4、去上清，注意吸干多余的水分，沉淀物加入50ulTE缓冲液，反复吹打重悬菌体，加入50ul溶菌酶，混匀后37℃水浴30min 5加入460ulTE，加入30ul 10%SDS，混匀，加入蛋白酶K3ul，37℃温浴30min以上直到溶液变澄清。澄清后，加入200ul 5mol/l的NaCl，充分混匀后，再加入预热好的200ul CTAB/NaCl溶液，混匀后65℃温浴30min 6.10000rpm/min离心5min取上清后后再加入等体积的氯仿异戊醇，混匀，12000rpm/min离心5min取上清，重复上次操作。直至界面不出现蛋白凝胶为止。 7.加入等体积Tris饱和酚/氯仿/异戊醇（25/24/1）。充分混匀后，12000r/min离心5min，吸取上清。重复上次操作。直至界面不出现蛋白凝胶为止。 8、小心取出上清用预冷两倍体积的无水乙醇沉淀，在冰上放置1-2h或放冰箱冻存1-2h，沉淀后，再以12000rpm/min离心10min。 9、用500μL 70%的乙醇洗涤两次，每次12000rmp/min离心2min，然后倒掉上清液（一定要倒扣离心管足够长的时间，是乙醇尽可能流干净，否则不易风干）。 10、真空干燥后，用50μLTE或超纯水溶解DNA，-20℃冰箱放置备用 我用这个方法提取的基因组DNA，以前怎么提取都没问题，但是最近提取总是降解，混匀的时候已经很轻了但是还是降解，还有其他导致降解的原因吗？后来我用试剂盒提取也降解，这和气温高有关系吗？操作的时候需要在冰上否？另外配好的Tris饱和酚/氯仿/异戊醇（25/24/1）溶液放在冰箱里是分层用的时候要混匀再用吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有225人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酿酒酵母基因组PCR出了16S的条带
已经有8人回复
- 基因组提取过程中加入溶菌酶有白色沉淀
已经有13人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
已经有20人回复
- 求助：大肠杆菌基因组的提取
已经有6人回复
- 关于细菌RT-PCR的一些问题，希望同行探讨一下
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于细菌基因组DNA提取的问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】提取细菌基因组DNA的试剂盒
已经有8人回复
- 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法
已经有14人回复
- 【求助/交流】基因组电泳结果
已经有22人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2011-06-26 21:45:40
3楼2011-07-03 19:06:05
5