应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的非特异扩增
51/1返回列表
查看: 2520  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的非特异扩增 已有6人参与

设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的情况，
是认为引物设计上的问题呢？还是认为buffer离子浓度的问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
1楼 2011-06-22 13:26:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。

都到38了，直接忽略就可以了，你就是用水做模板有时候都能有东西呢，楼上是正解，直接忽略
赞一下 回复此楼
用心
7楼2013-10-16 16:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2011-06-22 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助。也可以提高退火温度，增强特异性。 2011-06-22 21:38:37
换个地方合成，或者把你的原材料替换下，如果还是那样，那有可能你设计的有问题，NTC有扩增很苦恼
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-06-22 20:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-22 13:26:02:
设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的 ...

主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。

不过，还是谢谢你的意见。
赞一下 回复此楼
人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-06-23 08:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭