应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的非特异扩增
91/1返回列表
查看: 2596  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的非特异扩增 已有6人参与

设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的情况，
是认为引物设计上的问题呢？还是认为buffer离子浓度的问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
1楼 2011-06-22 13:26:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2011-06-22 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助。也可以提高退火温度，增强特异性。 2011-06-22 21:38:37
换个地方合成，或者把你的原材料替换下，如果还是那样，那有可能你设计的有问题，NTC有扩增很苦恼
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-06-22 20:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-22 13:26:02:
设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的 ...

主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。

不过，还是谢谢你的意见。
赞一下 回复此楼
人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-06-23 08:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-23 08:54:50:
主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。 ...

这样子的话，还是重新设计引物吧，不麻烦的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-23 14:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaolong11a

新虫 (小有名气)
问题解决了吗
回复此楼
多情总被无情扰。。。愁
6楼2013-10-16 15:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。

都到38了，直接忽略就可以了，你就是用水做模板有时候都能有东西呢，楼上是正解，直接忽略
赞一下 回复此楼
用心
7楼2013-10-16 16:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liminbwang
8楼2013-10-25 17:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉露金风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。

同上说法
回复此楼
9楼2016-06-20 22:43:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员l6uMzq 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 00:48 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 5/250 2026-11-01 00:44 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 00:41 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-11-01 00:36 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 00:35 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-10-31 23:23 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-10-31 23:18 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-10-31 23:17 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 24/1200 2026-10-31 22:39 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-10-31 21:54 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-10-31 21:51 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-10-31 21:51 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 9/450 2026-10-31 21:34 by YXM1FDCSE8Bn
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 13/650 2026-10-31 17:12 by hKe7U1kad5Sg
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +8 zuesli 2026-10-27 14/700 2026-10-30 22:44 by 好运连连公主
[基金申请] 论文的挂名怎么评判贡献？基金申请中，排名第一的挂名文章 +3 biily 2026-10-25 3/150 2026-10-30 18:33 by 旁观2020
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
[考博] 申博求助 20+3 Katrinae 2026-10-26 4/200 2026-10-27 09:56 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭