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q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的非特异扩增 已有6人参与

设计的引物及荧光探针,在进行不大于40循环荧光定量PCR时,
阳性曲线很符合自我要求,但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长,
而且数量还只是在48个中的1个或者2个,
很烦恼,不知道从何解决这样的情况,
是认为引物设计上的问题呢?还是认为buffer离子浓度的问题?
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人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这种情况一般是引物有二聚体,或者有非特异扩增。不过,无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线,属于正常范围,楼主可以忽略这个问题的。
2楼2011-06-22 16:48:35
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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助。也可以提高退火温度,增强特异性。 2011-06-22 21:38:37
换个地方合成,或者把你的原材料替换下,如果还是那样,那有可能你设计的有问题,NTC有扩增很苦恼
3楼2011-06-22 20:35:14
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q307078056

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-22 13:26:02:
设计的引物及荧光探针,在进行不大于40循环荧光定量PCR时,
阳性曲线很符合自我要求,但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长,
而且数量还只是在48个中的1个或者2个,
很烦恼,不知道从何解决这样的 ...

主要我这里是产品出厂的实验,

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长,让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率,或者在实验室范围里是可以接受的,

但对于企业产品来说,或许很难这么忽略掉,呵呵呵。

不过,还是谢谢你的意见。
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-06-23 08:54:50
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-23 08:54:50:
主要我这里是产品出厂的实验,

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长,让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率,或者在实验室范围里是可以接受的,

但对于企业产品来说,或许很难这么忽略掉,呵呵呵。 ...

这样子的话,还是重新设计引物吧,不麻烦的。
5楼2011-06-23 14:57:48
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

问题解决了吗
多情总被无情扰。。。愁
6楼2013-10-16 15:56:19
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taccycle

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体,或者有非特异扩增。不过,无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线,属于正常范围,楼主可以忽略这个问题的。

都到38了,直接忽略就可以了,你就是用水做模板有时候都能有东西呢,楼上是正解,直接忽略
用心
7楼2013-10-16 16:28:41
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8楼2013-10-25 17:19:21
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玉露金风

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体,或者有非特异扩增。不过,无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线,属于正常范围,楼主可以忽略这个问题的。

同上说法
9楼2016-06-20 22:43:39
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