应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的非特异扩增
91/1返回列表
查看: 2128  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的非特异扩增 已有6人参与

设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的情况，
是认为引物设计上的问题呢？还是认为buffer离子浓度的问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
1楼 2011-06-22 13:26:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2011-06-22 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助。也可以提高退火温度，增强特异性。 2011-06-22 21:38:37
换个地方合成，或者把你的原材料替换下，如果还是那样，那有可能你设计的有问题，NTC有扩增很苦恼
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-06-22 20:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-22 13:26:02:
设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的 ...

主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。

不过，还是谢谢你的意见。
赞一下 回复此楼
人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-06-23 08:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-23 08:54:50:
主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。 ...

这样子的话，还是重新设计引物吧，不麻烦的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-23 14:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaolong11a

新虫 (小有名气)
问题解决了吗
回复此楼
多情总被无情扰。。。愁
6楼2013-10-16 15:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。

都到38了，直接忽略就可以了，你就是用水做模板有时候都能有东西呢，楼上是正解，直接忽略
赞一下 回复此楼
用心
7楼2013-10-16 16:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liminbwang
8楼2013-10-25 17:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉露金风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-22 16:48:35
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。

同上说法
回复此楼
9楼2016-06-20 22:43:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员l6uMzq 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 290求调剂 +5 孔志浩 2026-03-12 10/500 2026-03-16 09:01 by 余晖&
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭