24小时热门版块排行榜    

查看: 2130  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的非特异扩增 已有6人参与

设计的引物及荧光探针,在进行不大于40循环荧光定量PCR时,
阳性曲线很符合自我要求,但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长,
而且数量还只是在48个中的1个或者2个,
很烦恼,不知道从何解决这样的情况,
是认为引物设计上的问题呢?还是认为buffer离子浓度的问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助。也可以提高退火温度,增强特异性。 2011-06-22 21:38:37
换个地方合成,或者把你的原材料替换下,如果还是那样,那有可能你设计的有问题,NTC有扩增很苦恼
3楼2011-06-22 20:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这种情况一般是引物有二聚体,或者有非特异扩增。不过,无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线,属于正常范围,楼主可以忽略这个问题的。
2楼2011-06-22 16:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q307078056

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-22 13:26:02:
设计的引物及荧光探针,在进行不大于40循环荧光定量PCR时,
阳性曲线很符合自我要求,但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长,
而且数量还只是在48个中的1个或者2个,
很烦恼,不知道从何解决这样的 ...

主要我这里是产品出厂的实验,

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长,让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率,或者在实验室范围里是可以接受的,

但对于企业产品来说,或许很难这么忽略掉,呵呵呵。

不过,还是谢谢你的意见。
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-06-23 08:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-23 08:54:50:
主要我这里是产品出厂的实验,

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长,让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率,或者在实验室范围里是可以接受的,

但对于企业产品来说,或许很难这么忽略掉,呵呵呵。 ...

这样子的话,还是重新设计引物吧,不麻烦的。
5楼2011-06-23 14:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 0805,333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
请填处理意见