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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的非特异扩增
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q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的非特异扩增 已有6人参与

设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的情况，
是认为引物设计上的问题呢？还是认为buffer离子浓度的问题？
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
1楼 2011-06-22 13:26:02
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q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-22 13:26:02:
设计的引物及荧光探针，在进行不大于40循环荧光定量PCR时，
阳性曲线很符合自我要求，但是无模板的空白试剂时常在38循环数时出现s形增长，
而且数量还只是在48个中的1个或者2个，
很烦恼，不知道从何解决这样的 ...

主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。

不过，还是谢谢你的意见。
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-06-23 08:54:50
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这种情况一般是引物有二聚体，或者有非特异扩增。不过，无模板对照如果在35个循环之后才出现扩增曲线，属于正常范围，楼主可以忽略这个问题的。
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2楼2011-06-22 16:48:35
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love_st

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助。也可以提高退火温度，增强特异性。 2011-06-22 21:38:37
换个地方合成，或者把你的原材料替换下，如果还是那样，那有可能你设计的有问题，NTC有扩增很苦恼
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3楼2011-06-22 20:35:14
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2011-06-23 08:54:50:
主要我这里是产品出厂的实验，

空白试剂出现低比例数的阳性非特异增长，让人很苦恼

忽略35个循环以后的阳性率，或者在实验室范围里是可以接受的，

但对于企业产品来说，或许很难这么忽略掉，呵呵呵。 ...

这样子的话，还是重新设计引物吧，不麻烦的。
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5楼2011-06-23 14:57:48
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