应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 250bp，可以直接测序，不转载体吗？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
141/2返回列表12下一页
查看: 1848  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[求助] 250bp，可以直接测序，不转载体吗？

250bp，可以直接测序，不转载体吗？
可以用双向测序，就可以得到全部确切的序列，这样理解对吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-19 20:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gumingzhu

金虫 (正式写手)
貌似不可以吧
回复此楼
改掉一个旧习惯有多难？？？？
2楼2011-06-19 20:45:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-19 20:45:49:
貌似不可以吧

为什么不可以呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-19 21:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-19 20:45:49:
貌似不可以吧

谢谢解答
回复此楼
4楼2011-06-19 21:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gumingzhu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不连在载体上你怎么扩增呢，就pcr出来的那点东西根本不够测序需要的浓度，要把片段连在载体上，一般转化入大肠进行扩增，再送菌液或者提质粒送测序
赞一下 回复此楼
改掉一个旧习惯有多难？？？？
5楼2011-06-19 21:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-19 21:11:35:
不连在载体上你怎么扩增呢，就pcr出来的那点东西根本不够测序需要的浓度，要把片段连在载体上，一般转化入大肠进行扩增，再送菌液或者提质粒送测序

我以前测序的时候，都是直接测的，最近有朋友要测200多的，我以前都是测1000bp的，所以不知道200bp可不可以测
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-19 21:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
tongxinkxy(金币+8): 2011-06-20 08:16:38
lstt09nk(金币+3): 感谢交流 2011-06-20 13:07:01
1   pcr产物测序，需要非简并引物

2  如果特异引物扩增，条带浓度达到回收要求，可以pcr产物测序。

3  根本不需要双向，一个反应足够了。

4  鉴于pcr产物测序会损失部分序列，结果肯定没有200bp了。 即便双向测序，也无法得到准确全部序列。

5  200bp的产物，做载体连接成功率非常高，推荐如果不是特别着急，还是转了吧。

解答完毕。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-06-19 21:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yitiandeng

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+8): 2011-06-20 08:16:41
不可以，这事因为即使测序效果好的话，也不行，应为测序峰图前分别剪切掉几十个核苷酸后你看看你的序列就好友100多了所以300BP以下的不建议做PCR直接测序
赞一下 回复此楼
8楼2011-06-19 23:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励 2011-06-20 13:07:33
完全可以，放心去测吧，

一定要双向，否则引物后的20bp还有末端几个bp都测不出
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-06-20 08:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2011-06-19 21:27:10:
1   pcr产物测序，需要非简并引物

2  如果特异引物扩增，条带浓度达到回收要求，可以pcr产物测序。

3  根本不需要双向，一个反应足够了。

4  鉴于pcr产物测序会损失部分序列，结果肯定没有200bp了。 即便 ...

两点错误，当然需要双向测序，一个方向测就会导致引物后几十个碱基不确定，双向测就可以根据另一端测过来的序列补上。实际上PCR产物测序是最准确的，连到载体测很有可能出错。
赞一下 回复此楼
10楼2011-06-20 16:39:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tongxinkxy 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +7 YYYYYNNNNN 2026-03-26 9/450 2026-03-30 20:29 by YYYYYNNNNN
[考研] 一志愿华中师范化学332分求调剂 +3 Lyy930824@ 2026-03-29 3/150 2026-03-30 20:15 by DHUSHUAI
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +25 稻妻小编 2026-03-26 25/1250 2026-03-30 20:11 by 滴滴上岸呀
[考研] 291求调剂 +8 Y-cap 2026-03-29 10/500 2026-03-30 19:31 by Y-cap
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-29 5/250 2026-03-30 19:02 by 源_2020
[考研] 105500药学求调剂，一志愿山东大学药学，348分 +3 gr哈哈哈 2026-03-28 3/150 2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 329求调剂 +8 星野? 2026-03-26 8/400 2026-03-30 13:41 by chemdavid
[考研] 材料与化工272求调剂 +21 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 21/1050 2026-03-30 10:52 by 晴空210210
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +10 大馋小子 2026-03-28 10/500 2026-03-29 23:35 by 飞行日记西
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +8 柳溪边 2026-03-26 8/400 2026-03-29 20:42 by 唐沐儿
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭