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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[求助] 250bp,可以直接测序,不转载体吗?

250bp,可以直接测序,不转载体吗?
可以用双向测序,就可以得到全部确切的序列,这样理解对吗?
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
tongxinkxy(金币+8): 2011-06-20 08:16:38
lstt09nk(金币+3): 感谢交流 2011-06-20 13:07:01
1   pcr产物测序,需要非简并引物

2  如果特异引物扩增,条带浓度达到回收要求,可以pcr产物测序。

3  根本不需要双向,一个反应足够了。

4  鉴于pcr产物测序会损失部分序列,结果肯定没有200bp了。 即便双向测序,也无法得到准确全部序列。

5  200bp的产物,做载体连接成功率非常高,推荐如果不是特别着急,还是转了吧。

解答完毕。
7楼2011-06-19 21:27:10
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-19 20:45:49:
貌似不可以吧

为什么不可以呢?
3楼2011-06-19 21:06:34
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gumingzhu at 2011-06-19 20:45:49:
貌似不可以吧

谢谢解答
4楼2011-06-19 21:06:48
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gumingzhu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不连在载体上你怎么扩增呢,就pcr出来的那点东西根本不够测序需要的浓度,要把片段连在载体上,一般转化入大肠进行扩增,再送菌液或者提质粒送测序
改掉一个旧习惯有多难????
5楼2011-06-19 21:11:35
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