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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

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[求助] 250bp，可以直接测序，不转载体吗？

250bp，可以直接测序，不转载体吗？
可以用双向测序，就可以得到全部确切的序列，这样理解对吗？

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1楼2011-06-19 20:28:39

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段家一凡

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by yixuanwin at 2011-06-19 21:27:10:
1 pcr产物测序，需要非简并引物

2  如果特异引物扩增，条带浓度达到回收要求，可以pcr产物测序。

3  根本不需要双向，一个反应足够了。

4  鉴于pcr产物测序会损失部分序列，结果肯定没有200bp了。即便 ...

两点错误，当然需要双向测序，一个方向测就会导致引物后几十个碱基不确定，双向测就可以根据另一端测过来的序列补上。实际上PCR产物测序是最准确的，连到载体测很有可能出错。