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wywangying169

银虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 两次QPCR前后目的基因的CT值不一样

我做了20个样本的QPCR，相对定量，因为其中一两个基因结果不好，重复性太差，于是选择重做，为了使补做的样本能和原来的样本之间能进行对比，采用了已经做好的某一样本当成对照一起做。问题是做出来了的对照和原来实验的CT值差了4，但是我的实验是没有问题。我想找理由，WHY？望QPCR高手解答。。。

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好好自学，好好工作

1楼 2011-06-16 16:09:08

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silicare

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【答案】应助回帖

★ ★
wywangying169(金币+4): 我做的相对定量，当然会加内参了。。。那就是我太傲慢了，对自已做过成千上百次的实验太过于有信心了吧。。具体理由也就不说了，我只是觉得大家肯定都有忽略的地方。。 2011-06-20 08:42:36
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-20 13:10:43

CT差4，模板就是十几倍出去了，所以可以基本排除加样误差

那就八成出在了扩增效率上

也就是你用的mix

同时，做对照你应该必须加上内参

其次，你的实验出了这么大的问题，你还说：“但是我的实验是没有问题”，心态上也需要调整一下