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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 两次QPCR前后目的基因的CT值不一样
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wywangying169

银虫 (小有名气)

[求助] 两次QPCR前后目的基因的CT值不一样

我做了20个样本的QPCR，相对定量，因为其中一两个基因结果不好，重复性太差，于是选择重做，为了使补做的样本能和原来的样本之间能进行对比，采用了已经做好的某一样本当成对照一起做。问题是做出来了的对照和原来实验的CT值差了4，但是我的实验是没有问题。我想找理由，WHY？望QPCR高手解答。。。
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好好自学，好好工作
1楼 2011-06-16 16:09:08
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love_st

金虫 (著名写手)
标本降解？加样误差？
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2楼2011-06-16 16:25:33
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wywangying169

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-16 16:25:33:
标本降解？加样误差？

这两种理由都不存在！
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好好自学，好好工作
3楼2011-06-16 16:31:12
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wywangying169(金币+1): 误差是绝对存在的，但是我对自已超级有信心，我的四个重复样本的误差只有0.0几，而CT值两次差成这样是绝对不可能的。。。你说的不是我想要的原因 2011-06-19 14:27:56
加样误差永远存在~~~！！！！！！
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4楼2011-06-17 21:47:34
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-06-17 21:47:34:
加样误差永远存在~~~！！！！！！

楼主非常人
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5楼2011-06-19 17:11:17
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silicare

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优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
wywangying169(金币+4): 我做的相对定量，当然会加内参了。。。那就是我太傲慢了，对自已做过成千上百次的实验太过于有信心了吧。。具体理由也就不说了，我只是觉得大家肯定都有忽略的地方。。 2011-06-20 08:42:36
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-20 13:10:43
CT差4，模板就是十几倍出去了，所以可以基本排除加样误差

那就八成出在了扩增效率上

也就是你用的mix

同时，做对照你应该必须加上内参


其次，你的实验出了这么大的问题，你还说：“但是我的实验是没有问题”，心态上也需要调整一下
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6楼2011-06-20 08:30:48
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momo2111

木虫 (小有名气)
楼主，您好，我也遇到了相同的问题，同一个样本两次pcr结果相差很大，请问您找到原因了吗？
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7楼2013-07-12 15:49:12
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