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chenglzu

至尊木虫 (著名写手)

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[交流] 微量细胞的QPCR

有没有虫友做过少量细胞的实时定量PCR，比如10-5000个细胞的，能不能给推荐个试剂盒或者方法？谢谢

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1楼 2010-09-21 23:32:34

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onjie

木虫 (著名写手)

笨鸟@快乐家族

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chenglzu(金币+2, 博学EPI+1): 2010-09-23 23:08:01
chenglzu(金币+2): 2010-12-19 21:26:10

所谓real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在 real-time 技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。（2）此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用。　　PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，最终PCR反应不再以指数方式生成模板，从而进入平台期。在传统的PCR 中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终扩增产物，因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。
理论上可以，楼主创新加油