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wywangying169

银虫 (小有名气)

[求助] 两次QPCR前后目的基因的CT值不一样

我做了20个样本的QPCR,相对定量,因为其中一两个基因结果不好,重复性太差,于是选择重做,为了使补做的样本能和原来的样本之间能进行对比,采用了已经做好的某一样本当成对照一起做。问题是做出来了的对照和原来实验的CT值差了4,但是我的实验是没有问题。我想找理由,WHY?望QPCR高手解答。。。
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好好自学,好好工作
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love_st

金虫 (著名写手)


标本降解?加样误差?
2楼2011-06-16 16:25:33
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wywangying169

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-16 16:25:33:
标本降解?加样误差?

这两种理由都不存在!
好好自学,好好工作
3楼2011-06-16 16:31:12
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wywangying169(金币+1): 误差是绝对存在的,但是我对自已超级有信心,我的四个重复样本的误差只有0.0几,而CT值两次差成这样是绝对不可能的。。。你说的不是我想要的原因 2011-06-19 14:27:56
加样误差永远存在~~~!!!!!!
4楼2011-06-17 21:47:34
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love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-06-17 21:47:34:
加样误差永远存在~~~!!!!!!

楼主非常人
5楼2011-06-19 17:11:17
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★
wywangying169(金币+4): 我做的相对定量,当然会加内参了。。。那就是我太傲慢了,对自已做过成千上百次的实验太过于有信心了吧。。具体理由也就不说了,我只是觉得大家肯定都有忽略的地方。。 2011-06-20 08:42:36
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-20 13:10:43
CT差4,模板就是十几倍出去了,所以可以基本排除加样误差

那就八成出在了扩增效率上

也就是你用的mix

同时,做对照你应该必须加上内参


其次,你的实验出了这么大的问题,你还说:“但是我的实验是没有问题”,心态上也需要调整一下
6楼2011-06-20 08:30:48
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momo2111

木虫 (小有名气)

楼主,您好,我也遇到了相同的问题,同一个样本两次pcr结果相差很大,请问您找到原因了吗?
7楼2013-07-12 15:49:12
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