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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切时间怎么确定
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)

[交流] 双酶切时间怎么确定

我自己在Prok2的基础上构建的载体，用Xbal 1和BamH1双酶切，20ul的体系，要切多长时间比较合适呢，2个小时，还是三个小时？有做过的吗？指点一下
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1楼 2011-06-13 15:58:02
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
加试剂先后顺序没关系，只要混匀就行了，如果2个酶在通用缓冲液里的酶切效率都是100%，那2h就够了，不放心可以延长时间，不要超过4h。
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8楼2011-06-15 19:53:26
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-14 07:43:44
这两个酶的最适温度都是37℃，一般酶切2h足够了，如果两个酶最适酶切温度不一样的话一定要分开酶切
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2楼2011-06-13 16:12:24
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-06-13 16:12:24:
这两个酶的最适温度都是37℃，一般酶切2h足够了，如果两个酶最适酶切温度不一样的话一定要分开酶切

俩酶一个是37度的，一个是30度的，用30度进行酶切的
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3楼2011-06-13 17:34:06
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 是的，跟酶量也有关系啊 2011-06-14 07:45:31
跟底物也就是DNA的量还有关系的。
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4楼2011-06-13 20:26:11
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