应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切时间怎么确定
101/1返回列表
查看: 2807  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苏拉的世界

金虫 (著名写手)

[交流] 双酶切时间怎么确定

我自己在Prok2的基础上构建的载体，用Xbal 1和BamH1双酶切，20ul的体系，要切多长时间比较合适呢，2个小时，还是三个小时？有做过的吗？指点一下
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-06-13 15:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-14 07:43:44
这两个酶的最适温度都是37℃，一般酶切2h足够了，如果两个酶最适酶切温度不一样的话一定要分开酶切
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-06-13 16:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-06-13 16:12:24:
这两个酶的最适温度都是37℃，一般酶切2h足够了，如果两个酶最适酶切温度不一样的话一定要分开酶切

俩酶一个是37度的，一个是30度的，用30度进行酶切的
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-13 17:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 是的，跟酶量也有关系啊 2011-06-14 07:45:31
跟底物也就是DNA的量还有关系的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-13 20:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 欢迎交流 2011-06-14 07:46:36
两个酶可以分开切的，你可以先同时切，切完跑胶看看，如果切不开的话，就分开切试试，一般不会有太大问题的
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2011-06-13 20:46:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutongyu77

铜虫 (初入文坛)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
我觉得：加入的顺序很关键，先加水，再加buffer,然后质粒模板，最后加内切酶，酶切3小时，模板加的稍微多点，回收时每个点样孔加50微升，效果就很好了。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-15 10:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
分开i切吧
回复此楼
7楼2011-06-15 11:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
加试剂先后顺序没关系，只要混匀就行了，如果2个酶在通用缓冲液里的酶切效率都是100%，那2h就够了，不放心可以延长时间，不要超过4h。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-06-15 19:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great4591

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
酶切不用那么长时间，应该根据酶单位的定义来就行，一般37度一个小时就行，关键是订好模板量
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-06-15 23:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qdwmq

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
与试剂的添加顺序无关，一般3h足够，NEB的Timesaver的话5min。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-06-15 23:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苏拉的世界 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭