应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切时间怎么确定
101/1返回列表
查看: 2808  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苏拉的世界

金虫 (著名写手)

[交流] 双酶切时间怎么确定

我自己在Prok2的基础上构建的载体，用Xbal 1和BamH1双酶切，20ul的体系，要切多长时间比较合适呢，2个小时，还是三个小时？有做过的吗？指点一下
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-06-13 15:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-14 07:43:44
这两个酶的最适温度都是37℃，一般酶切2h足够了，如果两个酶最适酶切温度不一样的话一定要分开酶切
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-06-13 16:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-06-13 16:12:24:
这两个酶的最适温度都是37℃，一般酶切2h足够了，如果两个酶最适酶切温度不一样的话一定要分开酶切

俩酶一个是37度的，一个是30度的，用30度进行酶切的
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-13 17:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 是的，跟酶量也有关系啊 2011-06-14 07:45:31
跟底物也就是DNA的量还有关系的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-13 20:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 欢迎交流 2011-06-14 07:46:36
两个酶可以分开切的，你可以先同时切，切完跑胶看看，如果切不开的话，就分开切试试，一般不会有太大问题的
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2011-06-13 20:46:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutongyu77

铜虫 (初入文坛)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
我觉得：加入的顺序很关键，先加水，再加buffer,然后质粒模板，最后加内切酶，酶切3小时，模板加的稍微多点，回收时每个点样孔加50微升，效果就很好了。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-15 10:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
分开i切吧
回复此楼
7楼2011-06-15 11:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
加试剂先后顺序没关系，只要混匀就行了，如果2个酶在通用缓冲液里的酶切效率都是100%，那2h就够了，不放心可以延长时间，不要超过4h。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-06-15 19:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great4591

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
酶切不用那么长时间，应该根据酶单位的定义来就行，一般37度一个小时就行，关键是订好模板量
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-06-15 23:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qdwmq

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
与试剂的添加顺序无关，一般3h足够，NEB的Timesaver的话5min。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-06-15 23:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苏拉的世界 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +3 想上学吖吖 2026-03-19 3/150 2026-03-19 23:25 by fmesaito
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-18 5/250 2026-03-19 22:40 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分，有科研经历，求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +8 Ncdx123456 2026-03-13 9/450 2026-03-18 14:40 by haxia
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭