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qyqy512

铜虫 (初入文坛)

[求助] 菌液pcr检测不对

最近做连接,菌液pcr检测条带不对,目的条带是2000左右,菌液pcr出来是1000,做了两次连接,都是这样的结果。求助高手啊
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 连续鼓励 2011-05-28 19:30:26
引用回帖:
Originally posted by qyqy512 at 2011-05-28 15:55:10:
感受态应该没问题,做别的基因都好,直接连TA克隆过夜,没有酶切。



TA克隆可以不用酶切吗?
还有你的电泳图给标注一下撒。。。
我给你的回复,你排除一下可能的情况。。。
一般就是那几个问题的。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-05-28 16:12:17
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 鼓励 2011-05-28 19:30:15
1:载体和基因酶切是否完全呢?可以上图看看
2:连接体系如何?时间呢?
3:感受态细胞的活性呢?
4:也不定用菌液做,可以用划到板子上的菌裂解后当模板的;
5:上图,我来看看。如果没有连接上,应该不会有条带的,为什么还会P出来一条1000bp的条带呢?难道是非特异性的?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-05-28 15:37:34
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qyqy512

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-28 15:37:34:
1:载体和基因酶切是否完全呢?可以上图看看
2:连接体系如何?时间呢?
3:感受态细胞的活性呢?
4:也不定用菌液做,可以用划到板子上的菌裂解后当模板的;
5:上图,我来看看。如果没有连接上,应该不会有 ...

感受态应该没问题,做别的基因都好,直接连TA克隆过夜,没有酶切。



3楼2011-05-28 15:55:10
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qyqy512

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-28 16:12:17:
TA克隆可以不用酶切吗?
还有你的电泳图给标注一下撒。。。
我给你的回复,你排除一下可能的情况。。。
一般就是那几个问题的。

那几个方法我之前也有想到,也一一排除过了,只有那个划板的方法我之前都没做过,电泳图上面的是目的片段cDNA PCR,下面的是菌液pcr。我质粒提出来酶切是糊的,没有目的条带。
5楼2011-05-28 16:26:45
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