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菌液pcr检测不对
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| 最近做连接，菌液pcr检测条带不对，目的条带是2000左右，菌液pcr出来是1000，做了两次连接，都是这样的结果。求助高手啊 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-05-28 15:37:34
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
qyqy512(金币+1): 谢谢 2011-05-30 08:34:00
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): Good！对楼主有帮助！经决定，授予专家指数。 2011-09-24 08:48:00
qyqy512(金币+1): 谢谢 2011-05-30 08:34:00
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): Good！对楼主有帮助！经决定，授予专家指数。 2011-09-24 08:48:00
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楼主可以提供下克隆载体的大小吗？如果我估计的没错，应该是空载的假阳性（or 只转化进了极少目的片段，所以能够用你的特异引物扩增），测序后就是你的载体片段。 这种情况我遇到过，我当时的PCR目的片段1200bp，但是最后筛选出来，1000bp和1200bp都有，我当时以为片段在不同种中的差异很大，就都测序了一些。结果1000bp的是空载的假阳性。 建议楼主也可以送一两个样测测序，毕竟也不贵。再就是优化连接及转化条件，减少假阳性的概率。 个人经验，希望有所帮助~~ |
7楼2011-05-30 00:13:42
herethere
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8楼2011-09-23 20:26:54
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