| 查看: 1775 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
PCR跑不出目的片段
|
|||
|
用beacon designer7.9设计了4对引物，分2次送出合成。就是跑不出片段。片段大分别是：571、699、626、652bp。 我换了DEPC水，重新提了RNA，跑了温度梯度，引物梯度，模板梯度，还用他人用的正常的cDNA跑，都不行，没有目得片段，但有引物二聚体。内参-action能跑出来，很亮，测了提取的RNA OD值，各项正常。 我跑的基因mRNA序列2525bp，有3个外显子，CDS区在第三个外显子里，前两个外显子片段很短，共388bp。我设计的引物上游在前两个外显子里，下游在第三个外显子里。另外，我开始在CDS区（第三个外显子里）设计的引物都跑出来了，很好。 引物稀释没问题，我跟内参一起稀释的，并且我有2管，都稀释了，都泡了PCR。 引物各种参数都正常，软件评分都很高。就是有的个别引物的错配有点高，但3和5端没有错配。 [ Last edited by zsdk on 2011-5-19 at 09:31 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 未知基因片段的钓取讨论，恳请大家帮我分析分析
已经有6人回复
- RT-PCR没做出来，求指点
已经有4人回复
- 转基因植株DNA PCR检测要不就不出带，要不就连水和阴性对照都出带？？？急急急！！！
已经有10人回复
- 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR没有条带
已经有8人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】质粒转不进农杆菌
已经有13人回复
- 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
3楼2011-05-19 13:52:32
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16332.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-05-19 11:56:45
4楼2011-05-19 14:20:10
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
5楼2011-05-19 16:34:38
