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关于胰蛋白酶
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| 请问从牛提取的胰蛋白酶和用基因重组方法获得的胰蛋白酶在成分上有什么区别？用于酶切反应时俩种途径获得的胰蛋白酶有什么区别？ |
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Biochemical
铜虫 (初入文坛)
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2楼2011-05-12 20:21:53
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重组胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶完全一致，重组胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中。 动物源性胰蛋白酶对细胞培养的影响以及重组胰蛋白酶在细胞培养中的使用优点 一是安全性 可能的病毒污染：目前，使用猪胰蛋白酶的疫苗生产企业要按照2010版药典规定检测可能的病毒含量，如猪细小病毒。 可能细菌、真菌、支原体污染：将影响细胞的生长和产品质量。 重组胰蛋白酶是基因工程重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。 二是纯度 杂质：因为历史的原因，用于组织培养的胰蛋白酶活性定为1:250，其实，1:250的胰蛋白酶中90%以上为杂质。 杂质的成分主要为来源于胰腺的脂类、蛋白和核酸等，在胰蛋白酶处理细胞的过程中，可能会透过细胞膜，可能对细胞的生长形成影响，特别是在科研中，用细胞来鉴定一些活性物质的作用时，可能会影响真实效果的检测。 重组胰蛋白酶纯度高，比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 三是消化效果与活性相关 活性：虽然用于组织培养的胰蛋白酶活性定为1:250，实际上，其活性却不固定，有的可能不到1:250，有的却可以高达1:1000--1:2000。因此，如果都用常规的配制方法如：0.25%来配制的话，将会使胰蛋白酶消化液的活性相差5倍甚至10倍。 弊端：胰蛋白酶的活性直接影响细胞消化结果和消化后细胞的生长。 活性过低：细胞消化不好，细胞消化所需时间长； 活性过高：细胞消化太快（比如：不到30s），易于消化过度，其危害是：轻则影响细胞生长，重则细胞死亡。消化后转接细胞密度减小，规定时间内生长不起来。 重组胰蛋白酶可按照活性单位投料，完全避免使用过程中过多或者过少投料。 |
3楼2017-08-02 11:19:49