| 查看: 1244 | 回复: 2 | |||
dingjunrong木虫 (小有名气)
|
[求助]
关于实时荧光定量PCR中绝对定量的一些问题
|
| 我要对样品中一个属的菌进行定量，模板是提取的基因组DNA，除了做标准曲线外还要有内标基因吗，如果要怎么选择，我是用自己连的质粒做标准曲线的，怎样才能准确测得它的浓度，从而确定它的拷贝数，标准曲线每次上样都要做一次吗？哪个公司的试剂盒质量比较好？万分感谢了~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有108人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 实时荧光定量PCR仪器使用问题
已经有5人回复
- Taqman实时荧光定量PCR本地信号过强是什么原因？
已经有7人回复
- 求助实时荧光定量PCR实验中的一些疑惑？急！
已经有5人回复
- 荧光定量PCR(相对定量)的分析结果2-△△Ct怎么看呀?
已经有31人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR引物跨内含子的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR中组织保存问题
已经有15人回复
- 【求助/交流】实时荧光定量pcr的问题
已经有7人回复
2楼2011-05-11 10:58:38
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
dingjunrong(金币+5): 谢谢 2011-05-12 09:33:09
dingjunrong(金币+5): 2011-11-07 09:55:38
dingjunrong(金币+5): 2011-11-07 09:55:38
|
内参基因是需要的，可以消除样品量的差异，一般用actin，tublin，GAPDH等等。 标准曲线一般每次都要加入，因为PCR影响因素很多，同样的样品进行不同次的PCR得到的Ct值一般都不一样，只有同一次PCR里的样品和标准曲线才能进行有效比较。 试剂盒的话，我只用过Takara和天根的，没觉得有什么差异，但是Takara的是混好的一管，比较方便，天根的用之前还得把两个东西混起来（不知道现在新产品如何）。我们生科院总的来说，用Takara和Toyobo的比较多。提醒一下，有的试剂盒含Rox，有的不含，也有的公司单独卖。Rox是AB公司最先用来校正溶液量差异的一种荧光染料，AB公司的荧光定量PCR仪需要用到，其他公司的有的不能用，有的是用不用都可以，这个要留意下。个人推荐能用ROX就用。 |
3楼2011-05-11 13:39:56
