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dingjunrong木虫 (小有名气)
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[求助]
关于实时荧光定量PCR中绝对定量的一些问题
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| 我要对样品中一个属的菌进行定量，模板是提取的基因组DNA，除了做标准曲线外还要有内标基因吗，如果要怎么选择，我是用自己连的质粒做标准曲线的，怎样才能准确测得它的浓度，从而确定它的拷贝数，标准曲线每次上样都要做一次吗？哪个公司的试剂盒质量比较好？万分感谢了~~ |
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2楼2011-05-11 10:58:38
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
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【答案】应助回帖
dingjunrong(金币+5): 谢谢 2011-05-12 09:33:09
dingjunrong(金币+5): 2011-11-07 09:55:38
dingjunrong(金币+5): 2011-11-07 09:55:38
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内参基因是需要的，可以消除样品量的差异，一般用actin，tublin，GAPDH等等。 标准曲线一般每次都要加入，因为PCR影响因素很多，同样的样品进行不同次的PCR得到的Ct值一般都不一样，只有同一次PCR里的样品和标准曲线才能进行有效比较。 试剂盒的话，我只用过Takara和天根的，没觉得有什么差异，但是Takara的是混好的一管，比较方便，天根的用之前还得把两个东西混起来（不知道现在新产品如何）。我们生科院总的来说，用Takara和Toyobo的比较多。提醒一下，有的试剂盒含Rox，有的不含，也有的公司单独卖。Rox是AB公司最先用来校正溶液量差异的一种荧光染料，AB公司的荧光定量PCR仪需要用到，其他公司的有的不能用，有的是用不用都可以，这个要留意下。个人推荐能用ROX就用。 |
3楼2011-05-11 13:39:56