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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] 这样的RNA电泳图,能不能做RT-PCR

用普通的电泳液和1%的琼脂糖跑点泳,结果如下,还能不能做RT-PCR?
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forward19

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+2): 2011-05-01 10:38:40
应该有DNA污染吧?去除DNA污染,再用2%的胶跑一次。条带没有弥散的话就可以了
2楼2011-05-01 10:25:09
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wkl1984(金币+2): 2011-05-01 10:41:23
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-05-04 16:27:32
抽的RNA还行,降解的不多,但是基因组挺亮的,是不是没有去基因组呢?如果你做的是真核生物的定量,并且设计的引物是跨内含子的,可以不去基因组;但如果你做的是原核生物的,必须把基因组去干净才能做。你最好以RNA为模板,跑一个目的基因的PCR,看能不能跑出来,如果能的话就不行了,有DNA污染;如果用RNA跑不出目的基因,那你就可以大胆用了
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
3楼2011-05-01 10:31:29
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wkl1984

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-01 10:31:29:
抽的RNA还行,降解的不多,但是基因组挺亮的,是不是没有去基因组呢?如果你做的是真核生物的定量,并且设计的引物是跨内含子的,可以不去基因组;但如果你做的是原核生物的,必须把基因组去干净才能做。你最好以 ...

我随后做了RT-PCR,扩增图谱如下,就是条带不清晰,用的是随机六聚体引物,marker好像没有分开

4楼2011-05-01 10:41:12
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475502411

铜虫 (著名写手)

不好意思,我没做过随机六聚体的,帮不上了,抱歉
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
5楼2011-05-01 10:46:57
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wkl1984

金虫 (小有名气)

6楼2011-05-01 11:05:36
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confus

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该可以吧,我前面提的也有些弥散,反转录后PCR效果还可以,楼上说真核生物一定要设计跨内含子的引物吗?请问这样的引物你是怎么设计的?
7楼2011-05-01 11:18:34
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yangqq8282

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wkl1984(金币+2): 2011-05-04 12:22:34
西瓜(金币+4): 鼓励交流。加这步的话RNA损失确实很多。 2011-05-04 16:28:37
DNA污染严重,可以用DNA酶消化,但是最好重新提取RNA,因为用DNA酶消化效果不好,消化完可能RNA也差不多了。
8楼2011-05-03 10:39:16
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biofeixue

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

怎么看不到你的图?
9楼2011-05-04 14:47:00
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wkl1984

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-04 14:47:00:
怎么看不到你的图?

这样的图,麻烦你看一下了

10楼2011-05-04 17:31:35
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