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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这样的RNA电泳图，能不能做RT-PCR
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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] 这样的RNA电泳图，能不能做RT-PCR

用普通的电泳液和1%的琼脂糖跑点泳，结果如下，还能不能做RT-PCR？
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1楼 2011-05-01 09:46:39
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forward19

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+2): 2011-05-01 10:38:40
应该有DNA污染吧？去除DNA污染，再用2%的胶跑一次。条带没有弥散的话就可以了
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2楼2011-05-01 10:25:09
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wkl1984(金币+2): 2011-05-01 10:41:23
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-05-04 16:27:32
抽的RNA还行，降解的不多，但是基因组挺亮的，是不是没有去基因组呢？如果你做的是真核生物的定量，并且设计的引物是跨内含子的，可以不去基因组；但如果你做的是原核生物的，必须把基因组去干净才能做。你最好以RNA为模板，跑一个目的基因的PCR，看能不能跑出来，如果能的话就不行了，有DNA污染；如果用RNA跑不出目的基因，那你就可以大胆用了
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2011-05-01 10:31:29
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wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-01 10:31:29:
抽的RNA还行，降解的不多，但是基因组挺亮的，是不是没有去基因组呢？如果你做的是真核生物的定量，并且设计的引物是跨内含子的，可以不去基因组；但如果你做的是原核生物的，必须把基因组去干净才能做。你最好以 ...

我随后做了RT-PCR，扩增图谱如下，就是条带不清晰，用的是随机六聚体引物，marker好像没有分开
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4楼2011-05-01 10:41:12
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475502411

铜虫 (著名写手)
不好意思，我没做过随机六聚体的，帮不上了，抱歉
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
5楼2011-05-01 10:46:57
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wkl1984

金虫 (小有名气)
лл
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6楼2011-05-01 11:05:36
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confus

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该可以吧，我前面提的也有些弥散，反转录后PCR效果还可以，楼上说真核生物一定要设计跨内含子的引物吗？请问这样的引物你是怎么设计的？
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7楼2011-05-01 11:18:34
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yangqq8282

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wkl1984(金币+2): 2011-05-04 12:22:34
西瓜(金币+4): 鼓励交流。加这步的话RNA损失确实很多。 2011-05-04 16:28:37
DNA污染严重，可以用DNA酶消化，但是最好重新提取RNA，因为用DNA酶消化效果不好，消化完可能RNA也差不多了。
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8楼2011-05-03 10:39:16
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biofeixue

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

怎么看不到你的图？
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9楼2011-05-04 14:47:00
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wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-04 14:47:00:
怎么看不到你的图？

这样的图，麻烦你看一下了
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10楼2011-05-04 17:31:35
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