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1985ming1985

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核同时表达两个蛋白,需要自行给其中一个加标签,请教了!!!

我现在要用PQE30同时表达一个基因座上的两个基因,A和B,他们两个之间还有一段GAP,转录方向是从B向A,用PQE30表达之后,B蛋白的N末端有组氨酸标签 ,但是A什么都没有,所以就提取不出来(这部分已经做过了,的确可以同时表达),我就想在A的C末端加组氨酸标签,在反向引物中加了六个GTG(对应于正向的就是CAC,应该就是组氨酸的密码子),这样PCR之后就可以把组氨酸标签加在A的C末端,请问各位大侠这样成嘛?
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

加吧,加了之后上镍柱洗脱,运气好的话不用上其它层析柱都能分离
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-04-29 23:55:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

不好意思我没遇到过,我只做过六个基因的表达而已,没做过几十个,经验不丰富。照理说应该会表达的,因为原先就能表达,克隆位点酶的切口都没问题的话,也不是稀有密码子的问题,怪了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-04-30 16:09:09
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